一、細胞培養程序:
A、目的:將培養于培養箱中的細胞進行繼代培養,或是因應實驗需求進行分盤。
B、操作程序:
1、實行注意事項 H 中操作前的準備步驟。
2、將 Flask 自培養箱中取出,于操作臺中用幫浦及巴斯特滴管抽去所有溶液。
3、用滴管吸取 10 ml PBS 溶液,加入至 Flask 中,以輕微搖晃的方式潤洗細胞層,之后用相同一支滴管將 PBS 溶液吸取至一干凈燒杯回收廢溶液。
4、拿取一只新滴管,重復步驟 3。(步驟3、4是為去除原有培養基當中的 FBS,以免 FBS 中和酵素的作用,使細胞壁上的黏附蛋白質無法被酵素分解,細胞會無法懸浮起來,無法取出細胞)
5、用一滴管吸取 2 ml 酵素溶液,加入至 Flask 當中,放入培養箱中培養 5-10分鐘。
6、用滴管加入 8 ml 新鮮培養基于 Flask 中,混合均勻后可用同一支滴管取出所有溶液,置于一干凈離心管。
7、將離心管放置于離心機中,以 1500 rpm 離心 5 分鐘。
8、于生物操作柜中,以幫浦與巴斯特滴管抽去上方殘余溶液。
9、此時視分盤狀況需要,加入適量的培養基,以滴管吸放的方式將沉淀的細胞重新懸浮起來,將全數溶液平均分配至分盤的容器當中。(需計算此時在每個容器當中的量有多少)
10、補充培養基至容器的合適容量。(注意事項 B)
11、放入培養箱中繼續培養或是進行實驗。至此完成細胞培養的程序。
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