膳食纖維可用于預防血脂異常、便秘和肥胖。 難消化性糊精被認為是 1991 年在日本推出的特定保健用食品(Tokuho)中的一種成分。分析含有大量低分子量水溶性膳食纖維(如難消化性糊精)的樣品,使用酵素-高效液相色譜法。特定保健用食品標準記載了難消化性糊精的定量方法,即對一系列前處理樣品進行 HPLC 分析,并測定膳食纖維部分與甘油(內標物)的峰面積之比。以下是我們對市售的難消化性糊精粉末進行了前處理,并參照 特定保健用食品標準中描述的步驟,使用水溶性SEC用色譜柱OHpak LB-802.5分析的應用實例。 另外,前處理方法與特定保健用食品標準中描述的方法有部分不同。
*根據《食品標簽標準》,低分子量水溶性膳食纖維是指色譜圖中保留時間早于紅色虛線位置(麥芽三糖的洗脫位置)的纖維。
1.將 1 g粉末樣品溶解在50 mL 0.08 M 磷酸鹽緩沖液(pH 值 6.0)中。
2.加入 0.2 mL α-淀粉酶,確認 pH 為6.0 ± 0.5。 *該樣品的 pH 值為 6.3。
3.放入沸水浴中,在 90 ℃ 下振蕩反應 30 分鐘。
4.冷卻后,加入 0.2 mL 蛋白酶和淀粉葡萄糖苷酶溶液,確認 pH 為6.0 ± 0.5。 *該樣品的 pH 值為 6.3。
5.在 60 ℃ 下振蕩反應 30 分鐘。
6.放入沸水浴中,在 100 ℃ 下加熱 10 分鐘。
7.冷卻后,加入 5 mL用水稀釋 10 倍的甘油。
8.用水定容至100 mL,制成酶處理溶液。
9.將 50 mL 酶處理液以 50 mL/h 的速度通過*離子交換樹脂。
*Amberlite™ IRA-67 和 Amberlite™ 200CT(杜邦)各25 mL 混合。10.將約 150 mL 水通過第9步的離子交換樹脂 (總流出液:200 mL)。
11.在旋轉蒸發儀中濃縮。
12.加水定容至 20 mL 。
13.用 0.45 µm 膜過濾器過濾,作為HPLC 樣品。
Sample: 20 μL
Pretreated indigestible dextrin powder
1.Dietary fiber fraction
2.Glucose
3.Glycerin (Internal standard)
Column
:Shodex OHpak LB-G 6B (6.0 mm I.D. x 100 mm) + LB-802.5 (8.0 mm I.D. x 300 mm) x 2
Eluent
:H2O
Flow rate
:0.5 mL/min
Detector
:RI
Column temp.
:80 ℃
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