上轉(zhuǎn)換材料的熒光光譜分析法-PE熒光分光光度計(jì)
序言 :上轉(zhuǎn)換發(fā)光材料 (Upc o n v e rsi o n p h o s p h o rsmaterial,UPM) 是一類(lèi)在長(zhǎng)波長(zhǎng)激發(fā)下發(fā)射短波長(zhǎng)光的材料,其特點(diǎn)是所吸收的光子能量低于發(fā)射的光子能量。由于使用紅外光作為激發(fā)光源,此類(lèi)材料在防偽標(biāo)記、激光探測(cè)和立體顯示上的用途已經(jīng)廣為人知。最近幾年來(lái) , 科學(xué)家們又發(fā)現(xiàn)上轉(zhuǎn)換發(fā)光材料有不易發(fā)生光漂白和發(fā)光強(qiáng)度高等優(yōu)點(diǎn) , 用在生物標(biāo)記中可以大大提高檢測(cè)靈敏度和線性范圍,因此上轉(zhuǎn)換發(fā)光材料的熒光發(fā)射光譜是表征其性能的一個(gè)重要指標(biāo),具有非常重要意義。
與傳統(tǒng)典型的熒光發(fā)光過(guò)程(只涉及一個(gè)基態(tài)和一個(gè)激發(fā)態(tài))不同,上轉(zhuǎn)換過(guò)程需要許多中間態(tài)來(lái)累積低頻的激發(fā)光子的能量。其中主要有三種發(fā)光機(jī)制:激發(fā)態(tài)吸收、能量轉(zhuǎn)換過(guò)程、光子雪崩。這些過(guò)程均是通過(guò)摻雜在晶體顆粒中的激活離子能級(jí)連續(xù)吸收一個(gè)或多個(gè)光子來(lái)實(shí)現(xiàn)的,而那些具有 f 電子和 d 電子的激活離子因具有大量的亞穩(wěn)能級(jí)而被用來(lái)上轉(zhuǎn)換發(fā)光。然而高效率的上轉(zhuǎn)換過(guò)程,只能靠摻雜三價(jià)稀土離子實(shí)現(xiàn),因其有較長(zhǎng)的亞穩(wěn)能級(jí)壽命。稀土離子的吸收和發(fā)射光譜主要來(lái)自?xún)?nèi)層 4f 電子的躍遷。在外圍 5s 和 5p 的電子的屏蔽下,其 4f 電子幾乎不與基質(zhì)發(fā)生相互作用,因此摻雜的稀土離子的吸收和發(fā)射光譜與其自由離子相似,顯示出極尖銳的峰(半峰寬約 10-20nm)。而這同時(shí)就對(duì)外部激發(fā)光源的波長(zhǎng)有了很大的限制。激光熒光光譜技術(shù)用于化學(xué)檢測(cè)領(lǐng)域具有信噪比高、靈敏度好、檢測(cè)快速等優(yōu)點(diǎn),特別是對(duì)于上轉(zhuǎn)換材料的發(fā)光檢測(cè)。商業(yè)化的 980nm 激光光源系統(tǒng)恰巧與它的吸收相匹配,為上轉(zhuǎn)換納米材料提供了理想的激光激發(fā)光源
PerkinElmer 是主要的熒光分光光度計(jì)生產(chǎn)商,也是技術(shù)上儀器供應(yīng)商。PerkinElmer 公司是采用脈沖氙燈做光源,具有熒光、磷光和化學(xué)發(fā)光三種測(cè)量模式,在磷光和化學(xué)發(fā)光模式下,儀器內(nèi)部激發(fā)光源自動(dòng)關(guān)閉,這樣就為 980nm 激光光源的使用提供了便利的條件,也為上轉(zhuǎn)換納米材料的熒光發(fā)光測(cè)試提供了硬件基礎(chǔ),而其它廠家大多數(shù)使用傳統(tǒng)的連續(xù)氙燈,不能通過(guò)軟件將其關(guān)閉,在使用激光光源時(shí),只能通過(guò)遮擋的方式將出光孔堵?。籔erkinElmer 公司采用脈沖氙燈光源,就可以很好的在內(nèi)部光源與外部激光光源之間進(jìn)行切換,當(dāng)需要使用外部激光光源系統(tǒng)時(shí),只需要通過(guò)軟件選擇激光測(cè)定模式即可,不需要通過(guò)其它物理遮擋方式,來(lái)遮擋儀器原有的激發(fā)光源,這是PerkinElmer 公司優(yōu)于其它公司的重要技術(shù)之一。這種操作不僅延長(zhǎng)了原有氙燈的使用壽命,而且也很好的限制了由于物理遮擋導(dǎo)致的雜散光影響;另外,由于采用了靈活的可拆卸的樣品架套筒設(shè)計(jì),如圖 1 所示,不僅固定了激光光源的輸出端,使之與樣品池垂直,保證激光光源能夠準(zhǔn)確的照射到待測(cè)樣品上而且,在進(jìn)行常規(guī)熒光測(cè)定時(shí),容易取下,大大簡(jiǎn)化了操作的繁瑣性。
硬件配置主機(jī):LS-55 型熒光分光光度計(jì) ( 圖 2)附件:激光光源及可拆卸樣品池套筒(圖 1)
測(cè)試結(jié)果改變不同條件測(cè)試 UCNP 上轉(zhuǎn)換材料得到的熒光發(fā)射譜圖,如下圖 3 所示。從圖可以看出樣品在 357nm、473nm、645nm 有熒光發(fā)射峰,這三個(gè)發(fā)射峰是 UCNP三個(gè)能級(jí)的光子發(fā)射,其中在 473nm 處強(qiáng),且熒光發(fā)射峰窄且尖銳,半峰寬大約 10nm,測(cè)試結(jié)果令人滿意。
結(jié)論P(yáng)erkinElmer 公司的 LS-55 熒光光譜儀連接激光做光源的熒光分析方法能夠準(zhǔn)確的測(cè)試上轉(zhuǎn)換材料的熒光發(fā)射峰,測(cè)試結(jié)果良好,為上轉(zhuǎn)換材料的發(fā)光表征提供了 解決方案。該方法操作簡(jiǎn)單,使用方便,成本低廉,能夠滿足絕大多數(shù)樣品的測(cè)試,并且易于拆卸,也能滿足常規(guī)樣品的測(cè)試,是一個(gè)非常實(shí)用的解決方案。
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