IBI305 (BYVASDA® )是由信達(dá)生物開(kāi)發(fā)的貝伐珠單抗生物類(lèi)似藥，該藥于2020年獲得國(guó)家藥品監(jiān)督管理局（NMPA）的初步批準(zhǔn)。IBI305是一種重組人源化的抗血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）單克隆抗體，它能夠選擇性地與血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）高親和力結(jié)合，從而阻斷VEGF與血管內(nèi)皮細(xì)胞表面受體的結(jié)合。

在2020年上市后不久，IBI305進(jìn)行了一次重大的批準(zhǔn)后變更，將原有的低滴度 CHO-K1S細(xì)胞株改造為高滴度的 CHO-K1SV GS-KO細(xì)胞株，并將生產(chǎn)規(guī)模從 1000 升擴(kuò)大到 3000 升。這種改變不僅可以減輕環(huán)境壓力，提高生產(chǎn)效率，還能降低生物制造的成本。因此，改變細(xì)胞株對(duì)于已上市的生物仿制藥或正在快速開(kāi)發(fā)的治療蛋白來(lái)說(shuō)具有吸引力。無(wú)論是最初的開(kāi)發(fā)還是批準(zhǔn)后的規(guī)模變更，都遵循了質(zhì)量源于設(shè)計(jì)（Quality by Design，QbD）原則，以評(píng)估關(guān)鍵質(zhì)量屬性（CQA）以及工藝變更對(duì) CQA 的潛在影響。

中國(guó)食品藥品檢定研究院（中檢院）近期發(fā)了一篇文章，對(duì)工藝變更前后的產(chǎn)品類(lèi)似性進(jìn)行了全面的研究^[1]。

生物學(xué)活性檢測(cè)

在本文中，對(duì)于生物學(xué)功能部分的研究，包括Fc受體親和力和C1q親和力的測(cè)定，都使用了基于BLI技術(shù)的Octet® 非標(biāo)記分子互作分析系統(tǒng)，與Avastin® 相比，無(wú)論是變更前還是變更后的 IBI305 ，都展現(xiàn)出了相似的結(jié)合親和力。

Fc介導(dǎo)效應(yīng)功能活性評(píng)價(jià)的背景和重要性

Fc片段能與效應(yīng)分子和效應(yīng)細(xì)胞上的Fc受體結(jié)合，使得抗體藥物產(chǎn)生抗體依賴(lài)的細(xì)胞毒性作用 (ADCC)、補(bǔ)體依賴(lài)細(xì)胞毒性作用（CDC）以及抗體依賴(lài)細(xì)胞吞噬作用（ADCP）。此外，也會(huì)影響抗體藥物的半衰期。這些受體包括FcγR（I, IIa, IIb, IIIc, IIIa, IIIb）, C1q和FcRn。各國(guó)關(guān)于生物大分子藥物活性檢測(cè)的指導(dǎo)原則都包含了Fc介導(dǎo)的效應(yīng)功能活性評(píng)價(jià)，這是生物大分子藥物質(zhì)量屬性研究的重要一環(huán)。國(guó)家藥品監(jiān)督管理局藥品審評(píng)中心2023年9月27日發(fā)布《抗體偶聯(lián)藥物非臨床研究技術(shù)指導(dǎo)原則》^[2]中，也強(qiáng)調(diào)了這些測(cè)試的重要性。

2021年，美國(guó)藥典專(zhuān)門(mén)推出了關(guān)于Fc介導(dǎo)的效應(yīng)功能活性評(píng)價(jià)方法的章節(jié)，并將基于生物層干涉技術(shù)的Octet® 非標(biāo)記分子互作分析系統(tǒng)作為其中方法之一^[3]。

受體結(jié)合活性實(shí)驗(yàn)方法

2020年6月，中國(guó)食品藥品檢定研究院發(fā)表了一篇類(lèi)似的文章，對(duì)多個(gè)批次的貝伐珠單抗原研藥與信達(dá)生物的IBI305的相似性進(jìn)行了比較和分析^[4]。通過(guò)這篇文章，我們可以大概了解如何使用Octet® 檢測(cè)受體活性的具體方法。

在進(jìn)行Fc受體親和力檢測(cè)時(shí)，采用商品化的生物素化受體，并將其固化在鏈霉親和素（SA）傳感器上，然后與不同濃度的抗體進(jìn)行結(jié)合解離。也可以使用帶有His標(biāo)簽的Fc受體進(jìn)行相關(guān)檢測(cè)，或者使用Fab2G傳感器固化抗體，檢測(cè)不同的受體。Octet®提供的Fc受體親和力檢測(cè)的應(yīng)用指南，可以在文末下載。

在進(jìn)行C1q親和力檢測(cè)時(shí)，可以將生物素化抗體固化在鏈霉親和素（SA）芯片上，或者使用ProL傳感器捕獲kappa輕鏈的抗體，然后與不同濃度的C1q進(jìn)行結(jié)合解離。BLI非常適合用于檢測(cè)C1q結(jié)合，睿智化學(xué)在2017年就發(fā)表專(zhuān)題文章，介紹使用BLI技術(shù)檢測(cè)C1q親和力的方法[5]。

Fc受體原料是成功建立親和力檢測(cè)實(shí)驗(yàn)的前提。這些原料生產(chǎn)公司本身也是用Octet®來(lái)檢測(cè)其產(chǎn)品的質(zhì)量。參考他們的質(zhì)檢方法，可以幫助用戶(hù)更快速地建立自己的檢測(cè)方法！

細(xì)胞株的改變可能是生物治療產(chǎn)品最復(fù)雜的工藝變更。該文首次報(bào)告了批準(zhǔn)后生產(chǎn)細(xì)胞株變更的可比性研究。根據(jù)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，細(xì)胞株的變更及相應(yīng)的工藝調(diào)整可能會(huì)對(duì)一系列關(guān)鍵質(zhì)量屬性（CQA）產(chǎn)生重大影響，尤其是對(duì)生物學(xué)活性的影響尤為顯著。為了最大限度地觀(guān)察質(zhì)量變化并減少不確定性，本文廣泛采用了包括Octet® 在內(nèi)的具有高特異性、高靈敏度、高準(zhǔn)確性和高重復(fù)性的先進(jìn)分析技術(shù)，從而證明了變更后的產(chǎn)品與變更前的產(chǎn)品具有相似的質(zhì)量。

Octet® 由于其良好的性能，已被NMPA等法規(guī)機(jī)構(gòu)認(rèn)定為檢測(cè)抗體表征的方法之一，也是親和力表征的金標(biāo)準(zhǔn)之一，已經(jīng)成為生物制藥行業(yè)的常用儀器。

除此之外Octet® 在藥物研發(fā)中還有以下優(yōu)點(diǎn)：

　　非標(biāo)記Direct Binding是趨勢(shì)，結(jié)果更準(zhǔn)確

　　快速測(cè)定親和力，更加定量化地表征分子互作

　　通量高，使用檢測(cè)，測(cè)試速度快，可以縮短研發(fā)周期

　　應(yīng)用多，包括親和力測(cè)定，EC50，濃度測(cè)試，從早期的親和力排序、表位分組到后期的細(xì)胞株開(kāi)發(fā)，工藝開(kāi)發(fā)的殘留物測(cè)試等應(yīng)用都可以涵蓋

　　用戶(hù)多，文章多，認(rèn)可度廣

　　萬(wàn)金油技術(shù)，可以用與檢測(cè)DNA，小分子，蛋白質(zhì)等各種生物分子

　　操作簡(jiǎn)便，耗材及維護(hù)成本低