關(guān)于鱟試劑制造進(jìn)一步研究的注意點(diǎn)及研究方向
1、制備采血的鱟要新鮮或用經(jīng)人工養(yǎng)殖幾天后的健康鱟,采血時(shí)血流必須通暢。采血量大,試劑質(zhì)量也高,但不同季節(jié)鱟血的質(zhì)量也有差異。
2、在制備TL的全過(guò)程中均須無(wú)菌操作,動(dòng)作應(yīng)輕,以防止細(xì)胞破裂。使用器具均須清洗干凈并去熱原。作者曾對(duì)器具做硅化與不硅化處理的比較,其結(jié)果發(fā)現(xiàn)器具硅化與否不影響靈敏度。因此,只要器具干凈并已去熱原即可以不硅化。
3、在抗凝劑方面,作者使用的茶堿量較大,觀察發(fā)現(xiàn)其細(xì)胞形態(tài)均正常,在采血瓶中分散均勻,且發(fā)生聚集的時(shí)間后移。之后再用抗凝劑2洗1次,有利于將血藍(lán)蛋白除去。除茶堿外,其他抗凝劑是否也可加大用量尚需探索。
4、氯化鈉一般用來(lái)配制抗凝劑與洗脫液,常用2.95%~3%的氯化鈉溶液,其濃度與海水濃度相當(dāng)。作者曾觀察4%濃度的氯化鈉溶液對(duì)變形細(xì)胞的影響,隨著觀察時(shí)間的延長(zhǎng),3%濃度的氯化鈉溶液中的變形細(xì)胞逐漸破裂溶解,并在洗滌中形成小塊,而4%的氯化鈉溶液中的細(xì)胞仍然均勻分散。作者對(duì)兩種不同濃度氯化鈉制品的質(zhì)量尚未進(jìn)行深入的比較。
5、關(guān)于重組鱟試劑:PyroSmart NextGenTM(PSNG)重組鱟試劑是一種基因工程合成的細(xì)菌內(nèi)毒素定量檢測(cè)試劑,PSNG鱟試劑完-全模擬了天然鱟試劑LAL的酶聯(lián)反應(yīng),包含重組C因子、重組B因子、重組凝固酶原,且剔除了容易引起假陽(yáng)性的G因子,不依賴鱟血,滿足可持續(xù)發(fā)展的目標(biāo),可以應(yīng)用動(dòng)態(tài)顯色法進(jìn)行測(cè)試和分析。
PSNG是一種靈敏而靈活的試劑,可用于USP、JP的細(xì)菌內(nèi)毒素測(cè)試章節(jié)進(jìn)行動(dòng)態(tài)顯色法細(xì)菌內(nèi)毒檢測(cè),不需要更換方法和設(shè)備,操作簡(jiǎn)便易行。
在PyrosKinetix®Flex細(xì)菌內(nèi)毒素定量檢測(cè)系統(tǒng)及酶標(biāo)儀上,PSNG和樣品可以按照50微升:200微升的比例使用,極大的節(jié)約試劑消耗。
【重組鱟試劑優(yōu)勢(shì)】
檢測(cè)便利:不需要更換方法和設(shè)備
快速高效:完成實(shí)驗(yàn)僅需(10-30)分鐘
節(jié)約試劑:鱟試劑使用量?jī)H需50微升
靈敏度高:靈敏度可達(dá)0.001EU/mL,實(shí)際可達(dá)0.0005EU/mL
特異性:PSNG不與(1,3)-β-D-葡聚糖發(fā)生反應(yīng),杜絕了假陽(yáng)性結(jié)果。
藥典法規(guī)護(hù)航:USP、EP、JP、ChP藥典法規(guī)收錄
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