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手性柱是用來分析或制備手性化合物的色譜柱，也同樣分正相和反相，然后根據填料不同可以分為環糊精手性柱、纖維素衍生物手性柱、蛋白類手性柱、配體交換手性柱等多種類型。
手性柱通過引入手性環境使對映異構體間呈現物理特征的差異，從而達到光學異構體拆分的目的。要實現手性識別，手性化合物分子與手性固定相之間至少存在三種相互作用。這種相互作用包括氫鍵、偶級-偶級作用、π-π作用、靜電作用、疏水作用或空間作用。手性分離效果是多種相互作用共同作用的結果。這些相互作用通過影響包埋復合物的形成，特殊位點與分析物的鍵合等而改變手性分離結果。由于這種作用力較微弱，因此需要仔細調節、優化流動相和溫度以達到良好的分離效果。
在使用時應注意：
1、流動相中任何時候不能含有無機酸，無機堿，不可用不含銅離子的鹽，否則將損壞設備。
2、流動相一定要采用預混合方式走等度，在線混合方式將損壞設備。樣品一定要用水或流動相溶解。
3、避免在pH低于4.0或高于7.0的條件下使用。
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