超高效液相色譜借助于HPLC(高效液相色譜)的理論及原理,涵蓋了小顆粒填料、非常低系統(tǒng)體積及快速檢測(cè)手段等技術(shù),增加了分析的通量、靈敏度及色譜峰容量。
超高效液相色譜儀使用時(shí)遇到以下故障應(yīng)該怎么處理
1.基線漂移偏大
(1)柱溫波動(dòng):控制好柱子和流動(dòng)相的溫度。
(2)流通池被污染或有氣泡:用甲醇或其他強(qiáng)極性溶劑沖洗流通池。
(3)檢測(cè)器出現(xiàn)阻塞,高壓造成流通池窗口破裂,產(chǎn)生噪音基線:取出阻塞物或更換管子,更換流通池窗需參考檢測(cè)器手冊(cè)。
(4)柱平衡慢:特別是流動(dòng)相發(fā)生變化時(shí),用中等強(qiáng)度的溶劑沖洗,提前預(yù)約客戶,在分析前用10~20倍體積的新流動(dòng)相對(duì)柱子進(jìn)行沖洗。
(5)流動(dòng)相污染、變質(zhì)或由低純度溶液配成:使用高品質(zhì)的化學(xué)試劑及高效液相色譜(HPLC)級(jí)的溶劑。
(6)樣品中有強(qiáng)保留的物質(zhì)(高K′值)以饅頭峰樣被洗脫出,從而表現(xiàn)出一個(gè)逐步升高的基線:使用保護(hù)柱,如有必要,在進(jìn)樣之間或在分析過(guò)程中,用強(qiáng)溶劑沖洗柱子。
(7)流動(dòng)相不均勻、配比不當(dāng)或流速有變化:在配制流動(dòng)相時(shí)應(yīng)充分搖勻,同時(shí)要根據(jù)目標(biāo)分離物和流動(dòng)相的極性合理配比,并保持流速恒定。
(8)柱子平衡時(shí)間短:HPLC色譜柱根據(jù)使用環(huán)境不同,平衡時(shí)間通常要控制在(30~60)min。
(9)檢測(cè)器沒(méi)有設(shè)定在吸收波長(zhǎng)處:檢測(cè)器沒(méi)有設(shè)定在吸收波長(zhǎng)處不僅影響檢測(cè)器的靈敏度和結(jié)果的度,還會(huì)使基線漂移加大,應(yīng)該將檢測(cè)器設(shè)定在吸收波長(zhǎng)處。
2.噪聲偏大
(1)在流動(dòng)相、檢測(cè)器或泵中有空氣:流動(dòng)相脫氣,并沖洗系統(tǒng)以除去檢測(cè)器或泵中的空氣。
(2)管路漏液:檢查管路接頭是否松動(dòng),泵是否漏液,是否有鹽析出和不正常的噪音。
(3)流動(dòng)相污染、變質(zhì)或有低純度溶液配制:使用高品質(zhì)的化學(xué)試劑及HPLC級(jí)的溶劑。
(4)溫度差異影響(柱溫過(guò)高,檢測(cè)器未加熱):減少差異或加上熱交換器。
(5)在同一條線上有其他電子設(shè)備:斷開(kāi)LC、檢測(cè)器和記錄儀,檢查干擾是否來(lái)自于外部,加以更正。
(6)檢測(cè)器/ 記錄儀電子元件的問(wèn)題:斷開(kāi)檢測(cè)器和記錄儀的電源,檢查并更正。
(7)泵震動(dòng):在系統(tǒng)中加入脈沖阻尼器。
(8)檢測(cè)器燈能量不足:更換燈。
(9)色譜柱填料流失或阻塞:更換色譜柱。
3.重復(fù)性偏大
(1)峰型不佳(如峰拖尾、峰寬較大、分裂峰等都不利于峰面積的計(jì)算,造成重復(fù)性偏大):可以改變色譜柱條件,改變溫度、流速等參數(shù),以獲得較尖銳的峰型,利于積分的性。
(2)泵流速不穩(wěn):可以根據(jù)泵流速檢定情況作出判斷,泵流速的穩(wěn)定性對(duì)峰面積的重復(fù)性影響非常大。例如:在其他條件不變的情況下,將流速由1.0mL/min改為0.5mL/min,結(jié)果保留時(shí)間加倍,峰面積也加倍,也可以看出峰面積在一定條件下基本與流速成反比。
(3)色譜柱影響:色譜柱固定相的流失,以及色譜柱對(duì)標(biāo)樣的吸收等都會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果;特殊情況下還會(huì)發(fā)生柱子對(duì)樣品的不可逆吸收,建議使用替代柱。
(4)柱溫有變化:柱溫對(duì)保留時(shí)間有顯著影響,保留時(shí)間的變化直接影響積分面積的大小。因此應(yīng)保持柱溫恒定。
(5)進(jìn)樣器漏液:進(jìn)樣器漏液導(dǎo)致進(jìn)入色譜柱的樣品量發(fā)生變化,進(jìn)而導(dǎo)致峰面積發(fā)生變化,應(yīng)檢查進(jìn)樣墊等易損部件以排除漏液。
(6)樣品本身的影響:樣品降解或溶劑揮發(fā)都會(huì)導(dǎo)致重復(fù)性偏大,應(yīng)確定方法的性和采取措施控制揮發(fā)。
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