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行為實驗指南之懸尾實驗(Tail suspension test)

來源:長沙百眾生物科技有限公司   2023年01月31日 11:47  

實驗介紹     

懸尾實驗(Tail suspension test, TST)是一種經典而又能快速評價抗抑郁藥物、興奮藥物、鎮靜藥物藥效的方法。該動物模型將實驗動物的尾部進行固定,使其頭部向下懸掛,動物在該環境中掙扎,企圖擺脫該困境,在經過努力仍無法擺脫后,出現間斷性不動,顯示“行為絕望”狀態。實驗動物在該環境中拼命掙扎試圖逃跑又無法逃脫,從而提供了一個無可回避的壓迫環境,一段時間的實驗后,記錄處于該環境的動物產生絕望的不動狀態過程中的一系列參數,動物的表現出的這種典型的“不動狀態”,反映了一種被稱之為“行為絕望狀態”,這種行為絕望模型與抑郁癥類似,而且對絕大多數抗抑郁藥物敏感,而且其藥效與臨床藥效顯著相關,所以被廣泛用于抗抑郁藥物的初選。

 

     實驗工具     

 

懸尾裝置,醫用膠帶,VisuTrack攝像跟蹤系統以及分析軟件(上海欣軟)。推薦使用塑料懸尾實驗箱,尺寸通常為55cm高* 60cm*寬* 11.5cm深。為了防止動物之間的觀察或相互作用,實驗箱中間有一個擋板實驗動物隔開。同時保證每只動物的隔間足夠寬敞,讓動物碰不到懸尾箱的箱壁。每個隔間的尺寸建議不低于:55cm高* 15cm*寬* 11.5cm深這個尺寸。小鼠的鼻子和實驗室箱子的地板之間的大致距離建議為20-25厘米。分析軟件推薦使用VisuTrack動物行為分析軟件軟件可任意截取視頻,準確性高。懸尾實驗與曠場實驗等測試不同,不應該跟蹤動物的質心/重心。VisuTrack動物行為分析軟件(上海欣軟)通過調查小鼠四肢的真實動作,實時分析小鼠搖擺(絕望狀態)、掙扎行為等指標,自動存儲原始實驗視頻并可進行分析,減少了人為誤差

 

     測試方法與指標     

 

測試方法:

1)  將已在動物房適應了三天的動物從SPF動物房中拉入實驗室。SPF級動物房應設置的參數為室溫(22±2℃),濕度(40±20℃)%,12 h 晝夜交替燈光使動物有正常晝夜節律,實驗動物在此環境可自由攝取食物和水。

2)  將動物輕柔地從籠中拿出來,以最快的速度將其尾巴固定好,不得給小鼠造成多余的壓力和應激狀態。具體操作為用醫用膠帶粘在距離尾巴尖-端 1 cm,以便將動物的尾巴從裝置懸掛桿上懸吊下來。動物尾巴尖-端與地面之間的高度約為 30 cm,使小鼠呈頭倒式位。

3)  攝像鏡頭需提前調好,將其調到水平對準小鼠身體的位置,以便錄像可呈現完-全的視野。

4)  實驗總共需錄視頻 6 min,錄像記錄動物實驗期間的行為,但記錄后4min動物的不動時間。

5)  記錄時長完成后,撕去醫用膠布將實驗動物小心取下來,并放回原籠中做好記錄。

6)  所有動物測試完成后,及時清理儀器中的糞便和尿液。

主要的指標及行為學意義:

1)  肢體不動:當動物停止掙扎時,身體保持垂直倒懸狀態,靜止不動,這個指標可視為實驗動物出現習得性無助后放棄掙扎的行為表現。動物在懸尾實驗中的不動時間越長,表明動物的抑郁程度越重。

2)  掙扎行為:當動物出現企圖掙扎、起身時的行為,動物的掙扎時間越短,表明動物的抑郁程度就更重。

數據如何統計:

記錄實驗動物的掙扎行為和不動時間,一般換算為以秒為單位的計量。通過與對照組進行對比,一般使用T檢驗即可,至于是否選擇配對或未配對則需要跟自己的實驗目的來選擇,此處不展開說明。

 

     實驗注意事項     

 

(測試時長、是否可重復、大小鼠的差異、品系)

1.膠帶要纏在接近動物尾巴尖-端的地方,不要纏在靠近尾巴根部的地方,這樣會影響動物的活動。若太靠下動物的掙扎與活動會受到限制,影響實驗結果。

2.背景板要與動物的顏色形成強烈反差,以便軟件識別,推薦使用白光背光板例如用白色小鼠時,需要選用黑色的背景板,以便視頻錄制清晰,易分辨;反之亦然用黑色的c57小鼠進行實驗時,則需要考慮用白色的背景板來完成襯托和凸顯

3.不同品種的小鼠懸尾實驗表現不同:例如空白對照c57小鼠不動時間較長,均值多大于100s; 空白對照組的ICR 小鼠不動時間均值多小于100 s; 抑郁行為判斷標準:不動時間與對照組相比有顯著性增加(P < 0. 05)即可,并不需要單純比較不動時長。

4.懸尾實驗不建議用較重的大鼠,因為大鼠只能通過它們的尾巴來支持它們的體重,這對大鼠來說是痛苦的。同樣的道理,應該注意避免使用異常重的小鼠(例如用于模擬肥胖的小鼠),在這種情況下,實驗者應該尋找替代性的測試,例如強迫游泳實驗。

5.動物從飼養環境帶入實驗環境應適應一段時間,通常至少一個小時以上

6.實驗環境應保持安靜,突然大或者一直持續的噪音會使實驗動物驚慌失措。

7.小鼠懸尾實驗持續時間通常為6分鐘。與強迫游泳實驗不同,小鼠在實驗初期更容易表現出不動。

8. 底部建議放置一個可拆卸的拖盤,收集糞便或尿液。

9. 懸掛后動物鼻尖與設備地板之前的參考距離在 20~25 cm 左右。

10.短時間不建議將此實驗重復第二遍,以免對實驗動物的心理狀態產生影響。

11.測試中,前肢只有小鼠運動,后肢不動,視為動物的絕望狀態

12.由于運動的慣性,小鼠的鐘擺式活動也需要視為動物的絕望狀態

13.懸尾與強迫游泳實驗相比,該實驗沒有因浸泡在水中而導致體溫降低的風險。這兩個實驗在靈敏度和性能上有各種重要的差異,一個實驗的結果可能無法在另一個實驗中重復故應理性看待實驗結果

14.懸掛用的膠帶應牢固地粘貼在小鼠尾部和懸掛桿上,并且足夠堅固以承受正在測試的小鼠的重量。但是,膠帶不應該過于粘滯應保證既可以順利固定動物,又不至于在實驗結束后難以實驗動物尾部移除膠帶尺寸可盡量統一

15.實驗結束后(通常是 6 分鐘),將動物放回鼠籠,應輕輕將膠帶從尾巴上拉下來,不要從尾巴上撕扯膠帶,避免給動物帶來痛苦

16.清潔用品,每次實驗完成,收集糞便和尿液,徹-底擦拭懸掛盒等儀器設備。

17.在實驗前幾天和后幾天推薦測試動物的行動能力,如自發活動等。目的是為了排除動物自身運動能力的影響,而更加說明是動物的抑郁程度不同而產生不動或掙扎樣行為。

18.本實驗在短期內不建議重復,若必須重復一般建議兩次實驗間隔半個月以上。

19.若是多只動物同一時間段做實驗,則需要注意每只動物的間隔,以及動物與動物之間需要用不透明的擋板隔開,防止出現干擾。

 

     實驗心得和經驗     

 

懸尾實驗步驟簡單,時間短,在一段時間內出數據的效率很高。比起強迫游泳,關于溫度沒有什么太需要注意的地方,但一定要注重動物福利的落實和準確識別不動狀態,做到識準、記準。

進一步探討與展望:

懸尾試驗非常適合測量引起急性抑郁。各種類型的抗抑郁藥物,如三環類藥物、選擇性血清素再攝取抑制劑 (SSRI) 和單胺氧化酶抑制劑 (MAOI)、精神興-奮-劑、精神安定藥、抗焦慮藥等,都已使用懸尾試驗進行了測試該模型和強迫游泳模型一樣可靠,在抑郁等藥物評價體系中占有不可替代的位置。

 

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