通用植物總RNA提取試劑盒適用于普通植物組織細胞的總RNA提取。采用裂解液可以迅速裂解細胞和滅活細胞RNA酶,結合多次柱漂洗的方式,可提取沒有蛋白、細胞代謝物等雜質污染的高純度、高質量的總RNA。
提取步驟:
1.將處理后的樣品在室溫靜置5~10分鐘,使得核酸蛋白復合物分離。
2.可選步驟:12,000rpm離心10分鐘,小心取上清轉入一個新的RNase free的離心管中。(當樣品富含多糖或是植物的塊莖部分時可能需要此額外的分離步驟)。
3.每1ml裂解液RL加200μl氯仿。蓋緊樣品管蓋,劇烈振蕩15秒,室溫靜置3分鐘。
4.在4°C12,000rpm離心10分鐘,樣品會分成三層:下層有機相,中間層和上清水相,RNA存在于上清水相中。把上清水相轉移到新管中(不要觸碰中間層)。
5.加入上清水相0.5倍體積的無水乙醇,立即吹打混勻。
6.轉入套有收集管的吸附柱RA中,12,000rpm 離心45秒,棄掉廢液。
7.加500μl去蛋白液RE,12,000rpm離心45秒,棄掉廢液。
8.加入500μl漂洗液RW(請先檢查是否已加入無水乙醇),12,000rpm離心45秒,棄掉廢液。
9.重復步驟7次。
10.將吸附柱RA放回空收集管中,13,000rpm離心2分鐘,盡量除去漂洗液,以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應。
11.取出吸附柱RA(避免吸附柱RA的底部碰到收集管里面的廢液),放入新的RNase-free離心管中,在吸附膜的中間部位加50 ~ 80μl RNase-free H2O,室溫靜置2分鐘,12,000 rpm離心1分鐘,取得RNA后,將RNA溶液保存在-80°C,防止降解。
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