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細(xì)胞凍存需要經(jīng)過(guò)那些過(guò)程
細(xì)胞凍存前需要做什么預(yù)處理嗎
01在細(xì)胞被消化和離心后，去除上清液并收集細(xì)胞沉淀，它們通常需要用冷凍保存液再次懸浮并轉(zhuǎn)移到冷凍保存管中。凍存液中一般含有滲透型的保護(hù)液如甘油或10%的二甲基亞砜(DMSO)和10%-90%胎牛血清。
02細(xì)胞內(nèi)外的主要成分是水。如果細(xì)胞在沒(méi)有保護(hù)溶液的情況下直接冷凍，細(xì)胞內(nèi)外的水會(huì)凝結(jié)成冰晶，對(duì)細(xì)胞造成內(nèi)源性的機(jī)械損傷。細(xì)胞內(nèi)的水凝結(jié)引起的細(xì)胞脫水也會(huì)引起細(xì)胞內(nèi)pH值的變化、蛋白質(zhì)變性、細(xì)胞內(nèi)部器官功能的喪失，甚至細(xì)胞核內(nèi)的DNA損傷，最終可能導(dǎo)致細(xì)胞死亡。
03而凍存液往往都是易溶解的小分子物質(zhì)，具有細(xì)胞滲透性，可以穿過(guò)細(xì)胞膜，進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，降低冰點(diǎn)，同時(shí)又可以提高細(xì)胞膜對(duì)水的通透性，使得細(xì)胞內(nèi)水分滲出到細(xì)胞外，從而減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成。
在準(zhǔn)備冷凍靶細(xì)胞之前，必須確保細(xì)胞處于最佳生長(zhǎng)狀態(tài)，這可以通過(guò)以下指標(biāo)進(jìn)行觀察：
1培養(yǎng)基的顏色和渾濁情況
培養(yǎng)基的顏色可以指示細(xì)胞是否過(guò)度生長(zhǎng)(例如，如果細(xì)胞是黃色，則表示它們過(guò)度生長(zhǎng))；介質(zhì)的渾濁度通常表明存在污染，不適合冷凍。
2細(xì)胞培養(yǎng)的時(shí)間
通常，建議將新恢復(fù)的細(xì)胞冷凍約兩周。如果細(xì)胞連續(xù)培養(yǎng)兩個(gè)月以上，性狀率會(huì)發(fā)生一些變化，此時(shí)的細(xì)胞不適合冷凍。
3細(xì)胞的數(shù)目
在凍存過(guò)程中，每只凍存管內(nèi)細(xì)胞最佳濃度為5x10^6個(gè)/ml—1x10^7個(gè)/ml，高密度或低密度對(duì)細(xì)胞存活率有一定影響。當(dāng)細(xì)胞數(shù)量不足時(shí)，不建議冷凍細(xì)胞。
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