羥基磷灰石Ca10(PO4)6(OH)2被加工成高純度球狀顆粒,可作為層析填料使用。由于其結晶的化學結構、立體構造的特點,羥基磷灰石與抗體的Fab片段、Fc片段可發生相互作用。所以至今為止,羥基磷灰石在抗體及蛋白質的純化、多聚體和殘留核酸的去除等工藝中,作為精細純化步驟的填料被廣泛使用。最近,由于其特殊的相互作用(金屬螯合、氫鍵等作用),羥基磷灰石作為陽離子交換型的混合模式填料,被人們重新認識。
羥基磷灰石由于在酸性溶液中化學穩定性相對較差,所以使用條件上存在一定的限制。
● 羥基磷灰石的主要用途
· 分離抗體及蛋白質的多聚體、異構體、分解物以及電荷異質體等目標產品內源性雜質
· 分離DNA、HCP、病毒等來自生產工藝、混入的外源性雜質/污染物
· 適用于最終(精純)步驟中的分離純化
● 在酸性條件下,與市售羥基磷灰石耐久性對比
在高吸附(高載量;下同)型羥基磷灰石Ca++Pure-HA、市售高吸附型(B公司、Type I)和高耐久型(B公司、Type II;載量較低)羥基磷灰石填料裝填的層析柱中,連續用弱酸性蒸餾水通液時,層析柱的理論塔板數的變化如上圖所示。市售品在大約80~90小時通液后,理論塔板數下降10%以上。與之相比,Ca++Pure-HA的理論塔板數雖然也會緩慢減少,但在約160小時之前,理論塔板數仍保持在90%以上。也就是說,Ca++Pure-HA屬于高吸附型,且在酸性條件下的耐久性更好。另外,在更低的酸性條件(pH 6.5~3.5)下使用和需要酸洗時,可以推薦使用耐鹽性陽離子交換填料TOYOPEARL Sulfate-650F和陽離子交換型的混合模式填料TOYOPEARL MX-Trp-650M。
● 羥基磷灰石和混合模式填料(包括耐鹽性離子交換填料)的性能比較
分離模式 | TOYOPEARL | 羥基磷灰石 | ||
耐鹽性陰離子交換填料 | 耐鹽性陽離子交換填料 | 混合模式 | ||
產品名稱 | NH2-750F | Sulfate-650F | MX-Trp-650M | Ca++Pure-HA |
填料基質 | 親水性聚合物 | 羥基磷灰石 | ||
粒徑 | 45 μm | 45 μm | 75 μm | 39 μm |
官能團、配基 | 多胺基 | 硫酸基 | 色氨酸 | Ca2+, PO43-, OH- |
官能團、配基密度 | 0.07~0.13 eq/L | ≥0.53 eq/L | - | - |
靜態吸附載量 (SBC:人IgG) | ≥70 g/L | ≥114 g/L | ≥75 g/L | ≥20 g/L* (55 g/L) |
出廠溶劑 | 20%乙醇** | 20%乙醇、 0.2 mol/L醋酸鈉 | 20%乙醇 | 干燥凝膠 (或1 mol/L的NaOH溶液) |
保存溫度 | 室溫 | |||
特點 | · 即使在鹽濃度較高條件下,也具有較高載量 · 有較大的細孔徑,去除 · 流穿效果好 | · 多聚體分離效果更好 · 即使在鹽濃度較高條件下,也具有較高載量 · 也可用于肝素類親和分離 | · 高吸附載量,分離峰形 · 即使在鹽濃度較高條 · 二價特異性抗體、 | · 具有與市售品同等或更高的吸附載量 · 填料耐久性也更高 · 具有與市售品同等或更高的性能,但價格更便宜 (注意) 洗脫液使用磷酸鈣、KCl |
* 動態吸附量(DBC):駐留時間是2分鐘;駐留時間5分鐘時,DBC是55 g/L-gel。
** TOYOPEARL NH2-750F需要使用0.1 mol/L HCl清洗,置換對離子后,才能保存在20%乙醇水溶液中。
● 羥基磷灰石和混合模式填料(包括耐鹽性離子交換填料)的產品一覽表
貨號 | 產品名稱 | 粒徑 (μm) | 包裝規格* | 備注 |
0045045 | Ca++Pure-HA | 39 | 50 g | 散裝填料(瓶) |
0045053 | Robocolumn Ca++Pure-HA, 8 × 200 μL | 39 | 200 μL × 8 | 96微孔板專用 |
0045054 | Robocolumn Ca++Pure-HA, 8 × 600 μL | 39 | 600 μL × 8 | 96微孔板專用 |
0023439 | TOYOPEARL NH2-750F | 45 | 250 mL | 散裝填料(瓶) |
0023443 | ToyoScreen NH2-750F | 45 | 1 mL × 6 | 預裝柱,需要使用ToyoScreen Holder(柱套) |
0023444 | ToyoScreen NH2-750F | 45 | 5 mL × 6 | 預裝柱,需要使用ToyoScreen Holder(柱套) |
0045021 | RoboColumn NH2-750F | 45 | 200 μL × 8 | 96微孔板專用 |
0045022 | RoboColumn NH2-750F | 45 | 600 μL × 8 | 96微孔板專用 |
0023468 | TOYOPEARL Sulfate-650F | 45 | 250 mL | 散裝填料(瓶) |
0023472 | ToyoScreen Sulfate-650F | 45 | 1 mL × 6 | 預裝柱,需要使用ToyoScreen Holder(柱套) |
0023473 | ToyoScreen Sulfate-650F | 45 | 5 mL × 6 | 預裝柱,需要使用ToyoScreen Holder(柱套) |
0045027 | RoboColumn Sulfate-650F | 45 | 200 μL × 8 | 96微孔板專用 |
0045028 | RoboColumn Sulfate-650F | 45 | 600 μL × 8 | 96微孔板專用 |
0022817 | TOYOPEARL MX-Trp-650M | 75 | 25 mL | 散裝填料(瓶) |
0022824 | ToyoScreen MX-Trp-650M | 75 | 1 mL × 6 | 預裝柱,需要使用ToyoScreen Holder(柱套) |
0022825 | ToyoScreen MX-Trp-650M | 75 | 5 mL × 6 | 預裝柱,需要使用ToyoScreen Holder(柱套) |
0045051 | RoboColumn MX-Trp-650M | 75 | 200 μL × 8 | 96微孔板專用 |
0045052 | RoboColumn MX-Trp-650M | 75 | 600 μL × 8 | 96微孔板專用 |
0021400 | ToyoScreen Holder | - | - | 柱套、轉接頭(入口1 mL專用)、(入口5 mL專用)、轉接頭(出口)各1個、堵頭2個 |
* Ca++Pure-HA是干燥粉末品。可提供不同體積包裝的產品。 ToyoScreen預裝柱可以直接連接HPLC系統。
Ca++Pure-HA是美國制造的產品,受美國相關出口法令的限制。
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