抗體藥物純化工藝中最關鍵的首要步驟使用Protein A填料進行親和分離。通過這一步，抗體純度可達到95%左右。但作為抗體藥物，純度還遠遠不夠，需要進行進一步純化。主要雜質包括多聚體、抗體片段，來自宿主細胞的蛋白質（HCP）和DNA、病毒、以及自Protein A填料脫落下來的Protein A配基。這些雜質可以通過陰離子交換填料和陽離子交換填料（或混合模式填料）或疏水填料去除。除此之外，往往也會使用陽離子交換填料通過吸附、洗脫模式來進行抗體的純化。

TOYOPEARL Sulfate-650F是一款具有硫酸根官能團的耐鹽型陽離子交換填料。對抗體的吸附載量高，可以有效地去除多聚體，宿主細胞蛋白以及脫落的Protein A配基。

l 高載量?耐鹽型陽離子交換填料Toyopearl Sulfate-650F的產品特性

? 是一款具有耐鹽性的（salt-tolerant）陽離子交換填料，在較高的鹽濃度下對抗體也有較高的載量。

? 填料的孔徑大，可以有效去除抗體的多聚體、宿主細胞蛋白（HCP）以及其他雜質。

? 具有很好的耐堿性，可以使用0.1 mol/L或者0.5 mol/L NaOH溶液重復對填料進行清洗和再生。

? 可以有效地去除病毒。

? 為了方便初期的填料篩選，配備了專門的ToyoScreen^®（1 mL， 5 mL）, MiniChrom^® （5 mL）預裝柱。

l 使用吸附、洗脫模式純化抗體

分離條件：                                                 

層析柱：Toyopearl Sulfate, 6.6 mmI.D.× 3.0 cm (1.0mL)

緩沖液：吸附 50mmol/L acetate-Tris (pH 5.2), 0.1 mol/L NaCl

洗脫 50mmol/L acetate-Tris (pH 5.2), 0.26 mol/L NaCl

洗脫 50mmol/L acetate-Tris (pH 5.2), 0.29 mol/L NaCl

洗脫 50mmol/L acetate-Tris (pH 5.2), 0.32 mol/L NaCl

清洗 50mmol/L acetate-Tris (pH 5.2), 1.0 mol/L NaCl

堿清洗 0.5 mol/L NaOH

流速   ：45 cm/hr （4分鐘保留時間）

檢測   ：UV (280 nm)

溫度   ：室溫

樣品   ：通過Protein A層析后收集的單抗（19.1 g/L）

* Protein A純化步驟均使用Toyopearl AF-rProtein A HC-650F。

※大量的樣品進行上樣（100 mg/mL充塡剤）、用鹽濃度為0.26 mol/L 的NaCl進行洗脫。純化結果，單體的回收率為83%，多聚體、HCP、脫落的Protein A配基等雜質均被有效地去除。

參考資料： Application Note; Increase monoclonal antibody purity with TOYOPEARL Sulfate-650F resin; Strong cation-exchange resin for capture and

removal of mAb Aggregates, Tosoh Bioscience LLC (2016).

l 使用Protein A填料的抗體純化的層析工藝案例

*使用流穿模式（FT）的情況下，根據抗體的種類來優化填料的粒徑以及緩沖液的鹽濃度，一般來說推薦使用160mM以上的鹽濃度。

Protein A填料 ： TOYOPEARL AF-rProtein A HC-650F

陽離子交換填料 ： TOYOPEARL Sulfate-650F, GigaCap S-650M, GigaCap CM-650M

： TOYOPEARL MX-Trp-650M（陽離子交換型混合模式填料）

陰離子交換填料 ： TOYOPEARL NH2-750F, GigaCap Q-650M, GigaCap DEAE-650M

疏水填料            ： TOYOPEARL Butyl-650/600M, Phenyl-650/600M, PPG-600M, Hexyl-650C

l TOYOPEARL Sulfate-650F產品參數

l TOYOPEARL NH2-750F填料以及篩選用預裝柱產品一覽表