在細胞培養過程中,也經常會對細胞進行凍存操作。細胞凍存通常是指將細胞放在低溫環境,減少細胞代謝,以便長期儲存的一種技術。細胞凍存是細胞保存的主要方法之一。
細胞凍存液,作為細胞凍存時必須使用的一種溶液,不僅僅是說只是用來進行細胞的保存,在細胞的購買、寄贈、交換和運送過程中也起著關鍵作用,因此選擇一款好的細胞凍存液就尤為重要。
如果不加任何條件直接凍存細胞,細胞內和外環境中的水都會形成冰晶,能導致細胞內發生機械損傷、電解質升高、滲透壓改變、脫水、pH值改變、蛋白變性等,從而引起細胞死亡。而細胞凍存液就相當于細胞的保護劑,在凍存細胞時將細胞懸浮于凍存液中,可使冰點降低,提高細胞膜對水的通透性,在緩慢的凍結條件下,能使細胞內水份在凍結前透出細胞,可以防止或減少冷凍冰晶對細胞的損傷作用。這樣就使細胞暫時脫離生長狀態而將其細胞特性保存起來,在需要時直接復蘇就可恢復細胞活性。
傳統細胞凍存液
傳統的細胞凍存液是使用培養基、血清和DMSO按照一定的比例混合,其中DMSO的含量是10%,血清的含量是10%,統稱為含血清細胞凍存液。
含血清細胞凍存液的一般的凍存方法是梯度降溫凍存法,
如先將冷凍管置于4℃冰箱10分鐘,然后移至-20℃冰箱30分鐘,再移至-80℃冰箱保存16-18個小時(或隔夜),最后才移至液氮罐中進行長期的儲存。
(其中需要注意的是-20℃條件下不可超過1個小時,以防止冰晶過大,造成細胞大量的死亡。)
無血清細胞凍存液
無血清細胞凍存液,不含血清,含DMSO、葡萄糖等各種細胞營養成分、pH調節劑等成分。不含動物來源性蛋白,能減少各類病毒、霉菌和支原體等污染,確保凍存細胞安全。通用于各種動物細胞株。2-8℃即可穩定保存,無需冷凍,即取即用。凍存細胞,無需程序降溫。凍存細胞復蘇率在90%以上。
用途
1.無血清細胞凍存液用于造血干細胞、間充質干細胞等干細胞的儲存。
2.無血清細胞凍存液用于T淋巴細胞、NK細胞等免疫細胞的存儲。
3.無血清細胞凍存液用于其他類型哺乳動物細胞的儲存。
產品性能
1.不含牛血清,無動物源組分。
傳統的凍存液,一般由胎牛血清、DMSO等組分組成。胎牛血清取自牛,因此,難以應用到需要避免接觸動物源的應用領域。用包括人白蛋白等蛋白組分替代血清的用途,無動物源組分。
2.2-8℃即可穩定保存,無需冷凍,即取即用。
為了避免反復凍融,傳統的細胞凍存液,需要分裝成小管后置于-20℃環境下保存。細胞沉淀加無血清細胞凍存液,直接放入-80℃長期儲存即可,無需再進行分裝。
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