l全面檢查系統, 處理漏液問題。
l對設置參數、緩沖液、試劑、閥等根據說明進行核實。
l 系統是否有改變
l根據文獻條件對比:標準樣品、色譜柱、參數日志是否有變化。
l收集信息: 觀察信息、手冊、書、技術支持。
l得出關于問題原因的結論
l開始工作
l在改變梯度、溫度或其它操作條件之前, 針對同一問題至少連續得到兩張色譜圖。 改變之后, 至少有兩張色譜圖顯示了同樣的改變效果。 尤其是在優化梯度條件的時候。
現象 | 原因 | 解決方法 | 注意事項 |
試劑壓力低 | 1 試劑泵中存在氣泡 2 試劑流速低 3 接頭漏液 | 1 檢查氣泡 2 檢查泄漏 3 檢查泵密封圈的完整性 | 將漏液的接頭擰緊 |
試劑壓力高 | 1 沉淀物堵塞流路 2 接頭擰的過緊 3 檢測器流通池的堵塞 4 背壓調節器故障 | 首先, 確定堵塞的精確位置。 接 下來一次斷開一個位置, 從背壓 調節器端向前直到壓力下降。 | A:部分堵塞,清洗管路。 B:*堵塞,更換配件。 |
試劑泵不工作或 流速錯誤 | 1 檢測泵的設置 2 檢查試劑增壓 3 檢查泵的密封圈是否泄漏 4 清洗止回閥 | ||
過壓瀉放閥打開 | 系統有堵塞 | 首先, 確定堵塞的精確位置。 接 下來一次斷開一個位置, 從背壓 調節器端向前直到壓力下降。 | 沖洗系統直到壓力降低,或更換適當組件。 |
常見色譜問題
現象 | 原因 | 解決方法 | 注意事項 |
背景信號高 | 1 洗提液污染 2 細菌生長 3 試劑污染 4 化學品不純 5 指印 | 清洗所有的試劑瓶并沖洗管線 | 柱后衍生反應對輕微的污染都很敏感 |
基線噪音 | 1 舊的泵密封 2 止回閥故障 3 檢測器噪音 4 化學品污染 5 試劑過期 | 1 檢查噪音的樣式 2 如果背景信號也提高, 檢查化學品是否污染或者是否后配置錯誤。 | 檢查噪音的頻率是否與泵的頻率一致。 如果噪音是隨機的, 檢查檢測器。 |
峰減小或消失 | 1 不恰當的試劑配制 2 未與水解試劑反應 3 反應器溫度設置錯誤 4 試劑流速設置錯誤 5 流通池污染 6 自動進樣器污染 7 樣品污染 8 色譜柱被金屬離子污染 9 樣品制備問題與系統腐 蝕 10 TRIONE®或 OPA 氧化 11 試劑泵未校正。 12 色譜柱鐵離子污染 | 1 制備新鮮的試劑 2 重新配制標準品 3 用熒光檢測器檢測 4 更換進樣器的轉子密封 5用 Li220或 Na220 清洗氨基酸柱 6 檢查反應器溫度 7 檢查試劑的氧化 8 清洗流通池 9 清除鐵污染 10 除去試劑瓶中的不銹 鋼篩板。 11 清潔或更換被腐蝕的組件。 | 除了 1-萘酚、 胺甲萘所有的 峰都消失= OPA過期 除了 1-萘酚所有的峰都消失 =水解試劑 峰大小變化=流通池、自動 進樣器污染或樣品降解。 所有峰消失=流通池、自動 進樣器污染或樣品降解。 樣品儲存問題 檢測器設置 鐵污染可能來自樣品、柱寸 時間過長、洗提瓶中的不繡 鋼篩板和系統的腐蝕。 |
保留時間不 穩定 | 1 平衡時間短 2 內體積太大 3 HPLC 比例閥泄漏 4 自動進樣器故障 | 1 以每次 2 分鐘增加平衡時間 2 重連系統, 按氨基酸安 裝部分 | |
假峰 | 1 洗提液試劑瓶的污染 2 噴射線或過濾器的腐蝕 3 揮發性胺 | 1 更換洗提液 2 用肥皂和水清洗時間瓶 3 去掉噴射線或過濾器 4 清除在氨基酸合成時使 用的試劑 | |
一 段 時 間 后基線飄移 | 1 污染物的生長 2 室溫的變化 | 1 沖洗色譜柱 2 控制室內溫度 |
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