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多肽固相合成—Fmoc法與Boc法

來源:北京西美杰科技有限公司   2009年03月11日 20:15  

多肽合成不僅具有很重要的理論意義,而且具有重要的應(yīng)用價值。通過多肽合成可以驗證新的多肽結(jié)構(gòu);設(shè)計新的多肽,用于研究結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系;為多肽生物合成反應(yīng)機制提供重要信息;建立模型酶以及合成新的多肽藥物等。1963年,R.B.Merrifield創(chuàng)立了將多肽羧基端的氨基酸固定在不溶性樹脂上,然后在此樹脂上依次偶聯(lián)氨基酸,延長肽鏈、合成多肽的固相合成法,在固相法中,每步反應(yīng)后只需簡單地洗滌樹脂,便可達到純化目的??朔私?jīng)典液相合成法中的每一步產(chǎn)物都需純化的困難,為多肽的自動化合成奠定了基礎(chǔ)。為此,Merrifield獲得1984年諾貝爾化學獎。

Merrifield所建立的Boc合成法是采用TFA(三氟乙酸)可脫除的Boc(叔丁氧羰基)為α-氨基保護基,側(cè)鏈保護采用芐醇類。合成時將一個 Boc-氨基酸衍生物共價交聯(lián)到樹脂上,用TFA脫除Boc,用三乙胺中和游離的氨基末端,然后通過DCC活化、偶聯(lián)下一個氨基酸,zui終脫保護多采用HF 法或TFMSA(三氟甲磺酸)法。用Boc法已成功地合成了許多生物大分子,如活性酶、生長因子、人工蛋白等。 

在Boc合成法中,反復(fù)地用酸來脫保護,這種處理帶來了一些問題:如在肽與樹脂的接頭處,當每次用50%TFA脫Boc基時,有約1.4%的肽從樹脂上脫落,合成的肽鏈越長,這樣的損失越嚴重;此外,酸處理會引起側(cè)鏈的一些副反應(yīng),Boc合成法尤其不適于合成含有色氨酸等對酸不穩(wěn)定的肽類。 1978 年,Chang、Meienlofer和Atherton等人采用Carpino報道的Fmoc(9-芴甲氧羰基)基團作為α-氨基保護基,成功地進行了多肽的Fmoc固相合成。Fmoc法與Boc法的根本區(qū)別在于采用了堿可脫除的Fmoc為α-氨基的保護基,側(cè)鏈的保護采用TFA可脫除的叔丁氧基等,樹脂采用90%TFA可切除的對烷氧芐醇型樹脂,zui終的脫保護避免了強酸處理。

自Merrifield發(fā)展成功了固相多肽合成方法以來,經(jīng)過不斷的改進和完善,到今天固相法已成為多肽和蛋白質(zhì)合成中的一個常用技術(shù),表現(xiàn)出了液相合成法*的優(yōu)點。近幾十年來,固相法合成多肽更以其省時、省力、省料、便于計算機控制、便于普及推廣的突出優(yōu)勢而成為多肽合成的常規(guī)方法。以 Boc和 Fmoc兩種方法為基礎(chǔ)的各種多肽自動合成儀也相繼出現(xiàn),并仍在不斷得到發(fā)展和完善。

Cali-Bio擁有多肽合成過程中的技術(shù)和工藝,已經(jīng)為美國眾多的科研機構(gòu)、大專院校及生物公司成功合成了數(shù)以萬計的高純度的多肽,應(yīng)用于抗體制備、藥物研發(fā)及多肽疫苗的研制等各個領(lǐng)域。西美杰將Cali-Bio的多肽合成服務(wù)引進中國,結(jié)合中國國情,旨在為中國客戶提供國外多肽合成的品質(zhì)、享有國內(nèi)合成價格的特殊服務(wù)。多肽合成-美國Cali-Bio多肽合成服務(wù)85折*回饋!

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