定量蛋白質(zhì)組學(xué)研究中的熒光差異凝膠電泳技術(shù)

要開(kāi)展蛋白質(zhì)組學(xué)研究，雙向電泳是你必須了解掌握的zui基礎(chǔ)的蛋白質(zhì)分離技術(shù)，正如普通凝膠電泳對(duì)于核酸純化。可是一提起雙向電泳，多數(shù)人還是會(huì)直皺眉頭----別搖頭擺手又嘆氣啦，今天的雙向電泳早已深入改進(jìn)了，特別是其中zui熱門(mén)的熒光差異凝膠電泳技術(shù)（DIGE），因?yàn)橄藗鹘y(tǒng)雙向電泳的一些弊端，已經(jīng)使得好多實(shí)驗(yàn)室對(duì)雙向電泳重拾信心，并逐漸得到越來(lái)越多的科學(xué)家的認(rèn)同。要知道基于雙向電泳的蛋白質(zhì)組分析文獻(xiàn)每年都穩(wěn)步增長(zhǎng)，采用DIGE技術(shù)進(jìn)行研究的科研論文的比重從2004年的不到2%猛增到2008年的19.6%呢。來(lái)吧，放下偏見(jiàn)，不要錯(cuò)過(guò)，跟著重新認(rèn)識(shí)這功能強(qiáng)大的DIGE吧。

前塵往事

一直備受爭(zhēng)議的雙向電泳何以這么不招人待見(jiàn)呢?長(zhǎng)話(huà)短說(shuō)。

生物樣品中蛋白質(zhì)的復(fù)雜多樣性遠(yuǎn)超核酸，使得單向電泳無(wú)法滿(mǎn)足蛋白樣品分離分析的需求。1975年O`Farrell介紹了雙向電泳技術(shù)，采用等電聚焦和SDS-PAGE在等電點(diǎn)和分子量?jī)蓚€(gè)方向上對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行分離，使得原本密密麻麻都擠在一條泳道上的蛋白質(zhì)得以在另外一個(gè)方向上有效分開(kāi)。這個(gè)在當(dāng)時(shí)創(chuàng)意的設(shè)計(jì)雖然被寫(xiě)進(jìn)了教科書(shū)中成為經(jīng)典技術(shù)，可惜在隨后的實(shí)際應(yīng)用中卻遇到種種問(wèn)題。由于當(dāng)時(shí)*向電泳的基質(zhì)是采用兩性電解質(zhì)配置pH梯度膠，兩性電解質(zhì)的不穩(wěn)定性導(dǎo)致等電點(diǎn)聚焦結(jié)果嚴(yán)重受到實(shí)驗(yàn)室條件和操作手法等偶然因素的影響，第二向電泳結(jié)果就更不用說(shuō)了----即使不是差之毫厘繆之千里，這種不確定性也導(dǎo)致了雙向電泳結(jié)果可重復(fù)性差，穩(wěn)定性差。不單各實(shí)驗(yàn)室之間的結(jié)果難以比較，即使同一實(shí)驗(yàn)室的結(jié)果也不怎么確定。我們都知道，實(shí)驗(yàn)的可重復(fù)性是實(shí)驗(yàn)可信度的重要指標(biāo)，也是同行評(píng)議的重要基礎(chǔ)。這種不穩(wěn)定導(dǎo)致的爭(zhēng)議可想而知。用不確定的方法研究不確定的未知，會(huì)“負(fù)負(fù)得正”嗎?不可能。再加上操作和結(jié)果分析的極其復(fù)雜，難怪一提起雙向電泳，人人皺眉。

直到上世紀(jì)九十年代，安瑪西亞公司（通用電氣生命科學(xué)的前身）推出了商品化的固相pH梯度膠條，極大的提高了等電聚焦的可重復(fù)性，這才使得上不同實(shí)驗(yàn)室間雙向電泳實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較成為可能。

可是雙向電泳技術(shù)，依然是不可替代的，具有其他任何分離技術(shù)*的高分辨率，可以看到相應(yīng)蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)和分子量信息，對(duì)于蛋白質(zhì)的翻譯后修飾和Isoform也可以清晰展示。因此，盡管當(dāng)時(shí)爭(zhēng)議不斷，一些科學(xué)家和生物技術(shù)公司依然青睞2D技術(shù)，依然不懈地針對(duì)雙向電泳的缺點(diǎn)而努力進(jìn)行技術(shù)改良。

不比不知道

比較，是一種習(xí)慣，一種本能，也是一種學(xué)問(wèn)。從學(xué)生時(shí)代“期末考試第幾名?”，到如今人人熱衷的各種的xxx排行榜，以及五花八門(mén)的比賽，從不間斷地彰顯人們對(duì)比較的熱愛(ài)。在生命科學(xué)研究領(lǐng)域，比較更是一種探索求知的zui重要的手段----腫瘤組織和正常組織有什么不同?從同一細(xì)胞中分化而來(lái)的不同組織有何差異?不比不知道，經(jīng)過(guò)各種比較手段找出差異，再研究這些差異的前因后果，一直是生命科學(xué)領(lǐng)域zui常用的研究思路。核酸表達(dá)差異的研究方法包括差異顯示，芯片技術(shù)，DD-PCR等等，但核酸表達(dá)差異的研究zui終無(wú)法替代蛋白質(zhì)差異研究。比較不同樣品間蛋白質(zhì)的種類(lèi)和量的差異，依然是另一個(gè)重要的研究方向。由于雙向電泳具有其他任何分離技術(shù)*的高分辨率，可以看到相應(yīng)蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)和分子量信息，對(duì)于蛋白質(zhì)的翻譯后修飾和Isoform也可以清晰展示。因而成為蛋白質(zhì)表達(dá)差異研究的重要手段。

然而，雙向電泳的膠間差異仍然很大，即使應(yīng)用現(xiàn)在很的雙向電泳分析軟件，仍然有很多蛋白質(zhì)斑點(diǎn)無(wú)法正確匹配。即使那些匹配的蛋白點(diǎn)之間也無(wú)法確定其準(zhǔn)確的定量關(guān)系。較大的系統(tǒng)誤差導(dǎo)致該技術(shù)無(wú)法有效地區(qū)分系統(tǒng)誤差和樣品間的差異，因此需要需要花費(fèi)大量的時(shí)間和勞動(dòng)運(yùn)行重復(fù)膠以期得到更準(zhǔn)確的定量結(jié)果。

繽紛熒光照亮雙向電泳

多色熒光標(biāo)記是偉大的技術(shù)發(fā)明，正是繽紛的熒光世界使得實(shí)驗(yàn)不再受困于孤獨(dú)的單色標(biāo)記，同時(shí)進(jìn)行“多重Multiplex”檢測(cè)成為可能。無(wú)論是高通量測(cè)序、定量PCR，芯片，流式，細(xì)胞成像，染色體原位雜交等等領(lǐng)域，多色熒光標(biāo)記都有著極為重要的應(yīng)用（詳細(xì)請(qǐng)看新技術(shù)專(zhuān)欄）。

1997年，Unlu等發(fā)表了*篇熒光差異凝膠電泳的論文，將不同的樣品分別用不同的熒光染料進(jìn)行標(biāo)記后混合在同一塊凝膠中進(jìn)行雙向電泳，極大地提高了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重復(fù)性和定量的準(zhǔn)確性。2001年，Tonge等以小鼠肝臟作為實(shí)驗(yàn)材料，評(píng)價(jià)了該實(shí)驗(yàn)方法，并給予了很高評(píng)價(jià)。安瑪西亞公司（現(xiàn)在的通用電氣公司）從Carnegie Mellon大學(xué)購(gòu)買(mǎi)了這種多通路熒光技術(shù)和雙向電泳技術(shù)結(jié)合的后，全面系統(tǒng)地發(fā)展改進(jìn)了熒光差異凝膠電泳技術(shù)，一如前面提及，如今的Ettan DIGE使得許多實(shí)驗(yàn)室對(duì)雙向電泳重拾信心，并受到越來(lái)越多科學(xué)家認(rèn)同。相比傳統(tǒng)的雙向電泳，Ettan DIGE技術(shù)究竟有哪些*的創(chuàng)新和改進(jìn)使之更勝*呢?

三色熒光標(biāo)記

傳統(tǒng)的雙向電泳膠間差異大，甚至難于區(qū)分系統(tǒng)誤差還是樣品間的表達(dá)差異，難以進(jìn)行蛋白質(zhì)差異研究。Ettan DIGE熒光差異凝膠電泳技術(shù)在傳統(tǒng)雙向電泳技術(shù)的基礎(chǔ)上結(jié)合了多重?zé)晒夥治龅姆椒ǎ稍谕粔K膠上同時(shí)分離多個(gè)分別由不同熒光標(biāo)記的樣品。由于不同的熒光標(biāo)記樣品有不同的激發(fā)波長(zhǎng)，可通過(guò)不同的濾光片記錄互不干擾的膠圖結(jié)果。由于有了多色熒光標(biāo)記，使得在同一塊膠中分離并分析多個(gè)樣本成為可能。這樣有效避免了不同膠間的系統(tǒng)誤差，特別適合比較不同樣本間差異。Ettan DIGE還在雙色熒光的基礎(chǔ)上增加了第三色熒光標(biāo)記，作為內(nèi)標(biāo)（后面介紹）。

熒光染料種類(lèi)雖多，但用于蛋白質(zhì)組樣品標(biāo)記的熒光染料不同于普通熒光染料，標(biāo)記后的蛋白質(zhì)不應(yīng)該有等電點(diǎn)上的改變，分子量上的改變也應(yīng)該保持zui小而且不同熒光染料導(dǎo)致的分子量的改變應(yīng)該一致。用于蛋白質(zhì)預(yù)先標(biāo)記的熒光染料分為兩類(lèi)，zui小標(biāo)記和飽和標(biāo)記。其中zui小標(biāo)記熒光染料包括三種，分別是Cy2，Cy3和Cy5。這三種熒光染料化學(xué)結(jié)構(gòu)上相似，分子量接近，帶有相同的活化基團(tuán)-NHS脂，可以特異性的標(biāo)記在賴(lài)氨酸殘基的ε氨基上，由于三種染料均帶有一個(gè)正電荷，這樣通過(guò)取代反應(yīng)蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)不會(huì)發(fā)生改變，保證了不同樣品中的相同蛋白質(zhì)可以泳動(dòng)到相同的位置。不過(guò)要注意，過(guò)多的染料標(biāo)記會(huì)導(dǎo)致蛋白質(zhì)的疏水性增加而不易溶解。保持1～2 %的蛋白質(zhì)的賴(lài)氨酸殘基被熒光標(biāo)記修飾，才可以維持被標(biāo)記的蛋白在電泳時(shí)的溶解性，因此，在標(biāo)記樣品時(shí)，保證合適的蛋白質(zhì)和染料的摩爾數(shù)比例至關(guān)重要。通過(guò)調(diào)整合適的pH值、合適的染料和蛋白質(zhì)的摩爾比，可以保證每個(gè)蛋白質(zhì)分子zui多只標(biāo)記上一個(gè)染料分子，來(lái)保證蛋白質(zhì)的分子量變化zui小。

另外，采用DIGE進(jìn)行蛋白質(zhì)分離后，如果需要切取蛋白質(zhì)斑點(diǎn)進(jìn)行進(jìn)一步分析，則需要注意，雖然經(jīng)熒光標(biāo)記后在電荷上未發(fā)生變化，但是由于熒光團(tuán)的加入（500Da左右）使得在標(biāo)記的和未標(biāo)記蛋白之間產(chǎn)生分子量上的差異，被熒光標(biāo)記的蛋白質(zhì)比未標(biāo)記的蛋白質(zhì)點(diǎn)在第二向SDS-PAGE時(shí)會(huì)有些許遷移偏差，對(duì)于那些小分子蛋白質(zhì)來(lái)說(shuō)，其熒光顯色的中心并非蛋白濃度zui高的地方，因此切取點(diǎn)這些蛋白質(zhì)斑點(diǎn)時(shí)需要考慮這個(gè)偏差。一般而言，在采用DIGE膠分析并得到相關(guān)差異蛋白質(zhì)結(jié)果后，需要運(yùn)行制備膠用來(lái)進(jìn)行斑點(diǎn)切取。

飽和標(biāo)記的熒光染料包括兩種，標(biāo)記蛋白質(zhì)上的半胱氨酸殘基，主要用于一些來(lái)源和珍貴的微量樣品的研究中。飽和標(biāo)記可避免上述問(wèn)題，但是使用成本較高。在采用飽和標(biāo)記分析蛋白質(zhì)組樣品時(shí)，必須*行染料量的滴定，以確定合適的還原劑和染料的加量，否則，在DIGE膠圖上很輕易造成水平鏈狀的點(diǎn)或垂直拖尾。另外，由于被標(biāo)記了的蛋白質(zhì)的分子量發(fā)生了改變，飽和標(biāo)記的膠圖和銀染的膠圖有所不同。

神奇的內(nèi)標(biāo)

可能是出于節(jié)約的考慮，一些實(shí)驗(yàn)“老手”常常忽略實(shí)驗(yàn)參照。其實(shí)是很不好的實(shí)驗(yàn)習(xí)慣。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中的參照對(duì)于實(shí)驗(yàn)來(lái)說(shuō)非常重要。內(nèi)標(biāo)是參照體系中的一個(gè)重要概念。Alban等詳細(xì)的闡述了內(nèi)標(biāo)的概念和意義。

Ettan DIGE技術(shù)*次在雙向電泳中引入了內(nèi)標(biāo)。DIGE的內(nèi)標(biāo)是將試驗(yàn)中所有樣品取等量混合，單獨(dú)用一種熒光染料（在zui小標(biāo)記染料中通常是Cy2）標(biāo)記，和所有樣品一起電泳。這意味著所有樣品中的蛋白質(zhì)點(diǎn)都會(huì)有對(duì)應(yīng)的內(nèi)標(biāo)。通過(guò)內(nèi)標(biāo)可以方便的對(duì)膠內(nèi)不同熒光染料標(biāo)記的樣品和膠間樣品進(jìn)行歸一化定量，而且不同凝膠之間的匹配變得異常輕松。

傳統(tǒng)雙向電泳技術(shù)可分別在等電點(diǎn)和分子量?jī)蓚€(gè)方向上對(duì)蛋白質(zhì)組進(jìn)行分離，然而在第三個(gè)方向即定量準(zhǔn)確性上并不盡如人意。內(nèi)標(biāo)在雙向電泳中的引入，極大地提高了結(jié)果的定量準(zhǔn)確性，可靠性和重復(fù)性，有效降低了系統(tǒng)誤差，給雙向電泳增加了第三個(gè)方向，確保了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的高可信度。

實(shí)驗(yàn)流程

DIGE的基本實(shí)驗(yàn)線路是電泳前以Cy2、Cy3 和Cy5三種熒光染料分別標(biāo)記蛋白質(zhì)樣品（其中包括一個(gè)蛋白質(zhì)內(nèi)標(biāo)）。然后將標(biāo)記好的蛋白質(zhì)樣品混合，在同一塊膠上進(jìn)行雙向電泳。電泳結(jié)果分別用3種不同的激發(fā)波長(zhǎng)得到不同顏色的熒光信號(hào)，根據(jù)這些信號(hào)的比例來(lái)判定樣品之間蛋白質(zhì)的差異。由于每個(gè)蛋白點(diǎn)都有它自己的內(nèi)標(biāo)，可避免在匹配時(shí)出現(xiàn)的誤差。進(jìn)行定量分析時(shí)也不再需要依靠于膠與膠之間的重復(fù)性，可用以比較數(shù)據(jù)庫(kù)中各個(gè)膠之間的蛋白質(zhì)的量的差異。軟件可全自動(dòng)根據(jù)每個(gè)蛋白點(diǎn)的內(nèi)標(biāo)對(duì)其表達(dá)量進(jìn)行校準(zhǔn)，保證所檢測(cè)到的蛋白豐度變化是真實(shí)的。DIGE技術(shù)可檢測(cè)到樣品間小于10%的蛋白表達(dá)差異，統(tǒng)計(jì)學(xué)可信度達(dá)到95%以上。

Friedman等通過(guò)采用內(nèi)標(biāo)的DIGE實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)對(duì)人直腸癌樣品進(jìn)行了系統(tǒng)研究，發(fā)現(xiàn)52個(gè)差異蛋白質(zhì)中，有42個(gè)是在有內(nèi)標(biāo)的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中才可能被發(fā)現(xiàn)，這些差異蛋白質(zhì)都是用來(lái)診斷直腸癌的潛在的生物標(biāo)記物，也可能成為治療的藥物靶標(biāo)。由于熒光標(biāo)記靈敏度很高，DIGE的靈敏度可與銀染和SYPRO Ruby 相媲美，可檢測(cè)到100～200pg 的蛋白質(zhì)，而其線形動(dòng)態(tài)范圍在5個(gè)數(shù)量級(jí)左右。即使少至5μg的微量樣本也可以用Ettan DIGE進(jìn)行蛋白質(zhì)組學(xué)分析。

同樣準(zhǔn)確的結(jié)果，只要跑更少的膠

跑雙向膠始終是體力和耐力活兒，需要花費(fèi)大量時(shí)間和精力的。相比傳統(tǒng)2D，DIGE可以讓你跑更少的凝膠而獲得同樣高質(zhì)量的準(zhǔn)確結(jié)果。

這首先歸功于多色熒光標(biāo)記。因?yàn)槎嗌珶晒鈽?biāo)記可以在同一次檢測(cè)中分析同一膠上的不同標(biāo)記樣品的熒光信息，因而可同時(shí)在一塊膠上、在相同電泳條件下同時(shí)分離2個(gè)樣品，提高了電泳膠的“利用率”，減少了實(shí)驗(yàn)需要的膠的總數(shù)，也節(jié)省了操作時(shí)間和成本。由于并行電泳減少膠間差異，使得分析結(jié)果的過(guò)程也大大簡(jiǎn)化;還可避免由于實(shí)驗(yàn)方法造成的蛋白質(zhì)斑點(diǎn)強(qiáng)度的差異，比如樣品在進(jìn)入膠條時(shí)會(huì)有不同程度的樣品損失等。

其次，在進(jìn)行傳統(tǒng)雙向電泳實(shí)驗(yàn)時(shí)，通常需要運(yùn)行生物學(xué)重復(fù)和技術(shù)重復(fù)（即重復(fù)膠）以排除樣品的個(gè)體差異和實(shí)驗(yàn)的系統(tǒng)誤差。由于DIGE技術(shù)將系統(tǒng)誤差降至zui低，又增加了內(nèi)標(biāo)對(duì)不同凝膠之間進(jìn)行定量的歸一化，因此采用DIGE技術(shù)，無(wú)需運(yùn)行重復(fù)膠。

以一個(gè)簡(jiǎn)單的例子，如果現(xiàn)在要研究某種藥物對(duì)小鼠肝臟蛋白質(zhì)組的影響，需要2組各4只小鼠（生物學(xué)重復(fù)），分別注射藥物及安慰劑，然后在某一時(shí)間點(diǎn)取肝臟抽提蛋白質(zhì)組樣品進(jìn)行分析。傳統(tǒng)2D電泳需跑4塊重復(fù)膠（技術(shù)重復(fù)），總共需要跑32塊2D凝膠。采用DIGE技術(shù)無(wú)需運(yùn)行重復(fù)膠，8只小鼠的肝臟蛋白質(zhì)可以分別運(yùn)行在4塊凝膠上即可以得到高質(zhì)量的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。凝膠數(shù)量減少至8分之1，不單所費(fèi)時(shí)間和成本大大減少，膠間差異得到了有效控制，找到真實(shí)的生物學(xué)差異的可能性也大大的提高了!實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性大幅提高，在確定的差異蛋白斑點(diǎn)中，假陽(yáng)性結(jié)果降至zui低，相關(guān)的質(zhì)譜鑒定成本也大幅降低!zui關(guān)鍵的是，得出錯(cuò)誤結(jié)論的可能性也降至zui低!（把藥物組設(shè)為A，安慰劑組設(shè)為B，小鼠的編號(hào)為1-4的話(huà)，考慮樣品的隨機(jī)化原則，正確的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)應(yīng)該是如下：你算得出為什么嗎?）

整體化解決方案

誰(shuí)都知道配套的產(chǎn)品用，不用考慮產(chǎn)品之間的兼容問(wèn)題。對(duì)于種類(lèi)繁多，樣品制備復(fù)雜的蛋白質(zhì)組研究，完善配套的工具可以使工作事半功倍。全力開(kāi)發(fā)并推廣DIGE的GE公司深諳此道。在雙向電泳設(shè)備的基礎(chǔ)上，GE提供全部的DIGE系統(tǒng)組件：專(zhuān)門(mén)用于DIGE的熒光染料，用于DIGE凝膠成像的掃描系統(tǒng)，的Typhoon系列激光共聚焦掃描成像系統(tǒng)，用于DIGE圖像自動(dòng)分析的DeCyder軟件。由于GE公司已經(jīng)購(gòu)買(mǎi)相應(yīng)熒光染料的，你不用擔(dān)心的問(wèn)題。

用于DIGE膠成像的設(shè)備包括專(zhuān)門(mén)用于Ettan DIGE成像的EDI成像儀和多功能激光共聚焦掃描成像儀Typhoon。熒光染料在激發(fā)和發(fā)射圖譜中有小部分重疊，可能會(huì)出現(xiàn)信號(hào)的相互干擾，因而選擇合適的掃描儀器及正確的參數(shù)設(shè)定至關(guān)重要。EDI成像儀專(zhuān)門(mén)用于DIGE膠成像，操作簡(jiǎn)單，無(wú)需過(guò)多的參數(shù)設(shè)置。如果你正好有Typhoon系列掃描儀，那就不需配置EDI了，Typhoon掃描成像系統(tǒng)專(zhuān)門(mén)為DIGE膠掃描進(jìn)行了優(yōu)化，掃描得到的膠圖可以被相應(yīng)的分析軟件直接讀取，其靈敏度可以達(dá)到銀染靈敏度的十倍，而*的動(dòng)態(tài)范圍和定量的準(zhǔn)確性也為DIGE系統(tǒng)能夠定量提供了硬件支持和保證。

DeCyder軟件是整個(gè)DIGE平臺(tái)的重要組成部分，共找點(diǎn)的設(shè)計(jì)，的膠間匹配，采用多種統(tǒng)計(jì)學(xué)分析方法令結(jié)果分析變得簡(jiǎn)單快速。雖然目前市場(chǎng)上有多種雙向電泳分析軟件宣傳可以分析DIGE凝膠，然而DeCyder軟件始終是那些期望定量和準(zhǔn)確分析的科學(xué)家的。DeCyder軟件目前已經(jīng)更新到6.5版，相比之下，其他的分析軟件都是在DeCyder分析軟件推出后，在學(xué)習(xí)和消化后更新自己的版本。正版價(jià)格貴，那也是*的。不過(guò)對(duì)于精密?chē)?yán)謹(jǐn)?shù)膶?shí)驗(yàn)，還是提倡正版的。

作為一個(gè)新的技術(shù)平臺(tái)，Ettan DIGE技術(shù)正逐漸被廣大科學(xué)家認(rèn)可，2007年Frost&Sullivan將2007年技術(shù)創(chuàng)新獎(jiǎng)授予了通用電氣醫(yī)療集團(tuán)，以表彰其將熒光差異凝膠電泳技術(shù)引進(jìn)美國(guó)蛋白電泳市場(chǎng)。2008年，包括DIGE平臺(tái)在內(nèi)的通用電氣的蛋白質(zhì)和蛋白質(zhì)組分離分析技術(shù)榮獲了生命科學(xué)工業(yè)成就獎(jiǎng)。DIGE技術(shù)也不斷被應(yīng)用到很多研究領(lǐng)域，到2008年5月份，DIGE技術(shù)的應(yīng)用文獻(xiàn)已經(jīng)多達(dá)1100余篇，平均影響因子為5.5。包括用于鑒定新藥蛋白靶點(diǎn)，開(kāi)發(fā)新的治療策略;可靠監(jiān)測(cè)疾病的發(fā)生過(guò)程和治療過(guò)程;鑒定生物標(biāo)記物用于早期診斷;藥物分子機(jī)理或毒性研究;理解發(fā)育過(guò)程;植物蛋白質(zhì)組學(xué)，環(huán)境蛋白質(zhì)組學(xué)等都有很多文獻(xiàn)。已經(jīng)成功分析的樣品包括細(xì)胞培養(yǎng)物，植物， 真菌， 細(xì)菌，海洋生物，動(dòng)物模型樣品，體液，如血液、腦脊液和唾液等，人的組織樣品,，病理切片，激光捕獲顯微切割（LCM）的組織和細(xì)胞等。

怎么樣?現(xiàn)在對(duì)DIGE感覺(jué)不一樣了吧!`