小鼠前列腺癌細胞的處理方法與操作流程！

一、細胞簡介

拉丁屬名：RM-1

細胞名稱：RM-1（小鼠前列腺癌細胞） 

種屬：小鼠 

年齡（性別） 

組織來源：前列腺癌 

生長特性：貼壁 

細胞形態(tài)：上皮細胞樣 

生長培養(yǎng)基：RPMI-1640(貨號:PM150110)＋10% FBS(貨號:164210-500)＋1% P/S(貨號:PB180120) 

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5% 溫度：37℃

傳代方法：消化3-5分鐘；1:3；3天內(nèi)可長滿

凍存條件：基礎培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS

注意事項：僅用于科學研究或者工業(yè)應用等非醫(yī)療目的，不可用于人類或動物的臨床診斷或治療，非藥用，非食用

二、收到細胞后的操作流程

1、您收到小鼠前列腺癌細胞RM-1后，請按照以下方法進行操作：

取出25cm2培養(yǎng)瓶，75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4小時以穩(wěn)定細胞狀態(tài)，然后換用新鮮*培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)或進行傳代。

2、細胞傳代：

1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞一次；

2）添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3）棄上清，沉淀細胞用12ml*培養(yǎng)基重懸，然后按1:2比例進行分瓶傳代，最后放入37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4）待細胞*貼壁后，觀察培養(yǎng)結(jié)果，之后進行換液培養(yǎng)或傳代。

3、細胞凍存：

1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞一次；

2）添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞，并放置于凍存管中；

4）先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h后轉(zhuǎn)入液氮中進行長期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。 

4、細胞復蘇：

1）從液氮中取出細胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入37℃水浴中解凍，直至凍存管中無結(jié)晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；

2）將凍存管中的細胞移至含5ml*培養(yǎng)基的15ml離心管中， 1000rpm離心5min；

3）棄上清，沉淀用5ml*培養(yǎng)基重懸，接種25cm2培養(yǎng)瓶，于37℃，5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4）第二天，換用新鮮*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

三、細胞的處理方法

（一）貼壁細胞

1、 接收到細胞，肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞 100X,200X 各一張）。

2、用 75%的酒精消毒外包裝,在超凈工作臺內(nèi)打開外包裝。

3、嚴格遵循無菌操作規(guī)范，打開細胞培養(yǎng)瓶。

4、37度平衡1-2小時。

5、用移液管吸取培養(yǎng)基，到50ml離心管中，剩下細胞密度達到80%至90%可以傳代，如沒有達到添加6ml新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

6、如果肉眼檢查上清有細胞，對50ml上清進行離心收集細胞，如果細胞連片狀態(tài)，棄掉上清對收集的細胞進行胰酶消化（1ml胰酶37度），接種培養(yǎng)。

（二）懸浮細胞

1、接收到細胞，肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞 100X,200X 各一張）。

2、用 75%的酒精消毒外包裝,在超凈工作臺內(nèi)打開外包裝。

3、嚴格遵循無菌操作規(guī)范，打開細胞培養(yǎng)瓶。

4、細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴禁直接傾倒）。

5、1000rpm，5min 離心，用吸管小心吸出上清，加入培養(yǎng)基，重懸細胞。

6、將重懸好的細胞轉(zhuǎn)入六孔板或者細胞培養(yǎng)瓶種，加入新鮮培養(yǎng)基，置于 37℃，5%CO2 培養(yǎng)（大部分細胞）。

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