腸桿菌和其他非苛養(yǎng)革蘭氏陰性桿菌鑒定試劑盒（比色法）說明書

【產(chǎn)品名稱】 通用名稱：腸桿菌和其他非苛養(yǎng)革蘭氏陰性桿菌鑒定試劑盒（比色法）

英文名稱：API 20 E

【包裝規(guī)格】 25 測試/盒、100 測試/盒。

【預(yù)期用途】 該產(chǎn)品用于腸桿菌和其它非苛養(yǎng)革蘭氏陰性桿菌的鑒定。 該產(chǎn)品用于可導(dǎo)致腹瀉、血流感染、尿路感染等的腸桿菌和其它非苛養(yǎng)革蘭氏陰性桿菌的鑒定，臨床常 見樣本來源有糞便、直腸拭子、尿、血等。

【檢驗原理】 API 20 E 試條由 20 個含干燥底物的微量小管組成。將菌懸液接種到管內(nèi)，使小管內(nèi)底物溶解。孵育過 程中，所產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物通過自發(fā)反應(yīng)或加入附加試劑后而變色。鑒定結(jié)果可根據(jù)說明書的判讀表進(jìn)行 讀出，也可參照生化譜檢索手冊或鑒定軟件，得到鑒定結(jié)果。

【主要組成成分】 

試劑盒組成（用于 25 個敏感性測試） 

- 25 個 API 20 E 試條 

- 25 個孵育盒 

- 25 張結(jié)果報告單 

- 1 個封口夾 試劑盒組成（用于 100 個敏感性測試） 

- 100 個 API 20 E 試條（4x25 試條） 

- 100 個孵育盒 - 100 張結(jié)果報告單 

- 1 個封口夾 試劑條成分 

API 20 E 試條的成分請參閱說明書后的結(jié)果判讀表。

需要但沒有提供的試劑和材料 

試劑 

- 0.85 % API NaCl 培養(yǎng)基，5 mL (Ref. 20 230)或 API 懸浮培養(yǎng)基，5 mL (Ref. 20 150)

- API 20 E 試劑盒(Ref. 20 120)或 單個的試劑：

TDA (Ref. 70 402) 

JAMES (Ref. 70 542) 

VP 1 + VP 2 (Ref. 70 422) 

NIT 1 +NIT 2 (Ref. 70 442) 

- Zn 試劑(Ref. 70 380)  

- 氧化酶（Ref. 55 635*)

*某些國家不銷售此產(chǎn)品：請使用相近的試劑。 

- 礦物油（Ref. 70 100)

材料：

- 吸管或 PSI 管 

- 安瓿保護(hù)套 

- 安瓿架

【儲存條件及有效期】 2~8°C 保存，有效期為 18 個月。

試條采用鋁袋包裝并附有干燥劑。有效期為 18 個月。

一旦打開鋁袋(*)，請使用封口夾(試劑盒己含有)重新封口，以保證試條的干燥：把鋁袋撕開處末端放入 打開的夾子并小心的加緊兩端。開啟鋁袋后，在 2~8°C 環(huán)境并封好口的環(huán)境下，試條可享有 10 個月的 有效期(或包裝盒上的有效期，以較短時間為準(zhǔn))。

（*）建議開封的方法: 在封口下方剪開鋁箔裝，為防止意外損壞干燥劑，開封時應(yīng)保持鋁箔袋垂直。 

生產(chǎn)日期：詳見外包盒標(biāo)簽。 

有效期至：詳見外包盒標(biāo)簽。

【適用儀器】 

- API 20 E 數(shù)值分析圖譜(Ref. 20 190)或鑒定軟件。 

- 微生物實驗室常規(guī)設(shè)備

【樣本要求】 

API 20 E 不能直接用于臨床或其他標(biāo)本（例如血樣，尿樣和糞樣、直腸拭子等等）。需要進(jìn)行鑒定的微 生物必須首先根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)微生物處理技術(shù)于適合腸桿菌和/或非苛養(yǎng)革蘭陰性桿菌生長的培養(yǎng)基上分離培 養(yǎng)。 

【檢驗方法】

氧化酶試驗： 必須按照制造商的使用說明進(jìn)行氧化酶試驗。由于它是最終圖譜的組成部分，請將其結(jié)果記錄于報告單 上（第二十一個試驗）。 

試條的準(zhǔn)備 

• 準(zhǔn)備一個培養(yǎng)盒（盤和蓋子），倒入約 5mL 蒸餾水或軟化水

【或其它不含添加劑或不含有能產(chǎn)生揮發(fā) 性氣體（如 Cl2, CO2,等）的化學(xué)物質(zhì)的水】于盤的蜂窩小凹中，造成一個濕室。 

• 在盤的長邊寫上菌株號(不要寫在蓋上，因為操作過程中很容易將蓋子放到其它試條上） 

• 從包裝中取出試條。

• 將試條置于培養(yǎng)盒中。 注意：API 20 E 只能用于腸道細(xì)菌和或非苛養(yǎng)的革蘭陰性桿菌。苛養(yǎng)菌由于對營養(yǎng)有特殊要求并且需要 合適的防護(hù)措施(例如布魯氏菌屬 Brucella 和法朗西絲菌屬 Francisella)，這些菌沒有包括在 API 20 E 數(shù) 據(jù)庫中。 必須采用其它方法，來排除或確認(rèn)這些菌的存在。 接種物的準(zhǔn)備 

• 根據(jù)“警告及注意”一欄所列方法打開一安瓿 API 0.85% NaCl 培養(yǎng)基（5mL)或一安瓿 API 懸浮培養(yǎng)(5  mL), 或用含 5mL 0.85 NaCl 鹽水或不含添加劑的無菌蒸餾水。

• 用吸管或 PSIpette 從分離平板上挑取單個分純菌落至懸浮基物中。建議使用新鮮培養(yǎng)物（18-24 小 時）。

• 仔細(xì)研勻以達(dá)到均一的細(xì)菌懸液。 制備好的菌懸液必須立即使用。 注意：大多數(shù)弧菌（Vibrio)均嗜鹽，如懷疑菌株為弧菌，請使用 0.85% NaCl (5mL)培養(yǎng)基。

試條的接種 

• 用同一根吸管，將菌懸液加入到試條的小管內(nèi)。為避免在小管的基底部形成氣泡，請將試條輕微向前 傾斜并把吸管或者 PSI 管緊靠小杯邊緣加入菌液）： 

- CIT、VP 和 GEL 小管，菌液需充滿的管部和杯部。 

- 其它管僅充滿管部(不是杯部)。 

- 在試驗 ADH, LDC, ODC, H2S 和 URE 小杯內(nèi)加入礦物油以形成厭氧環(huán)境。

• 蓋上培養(yǎng)盒。于 36℃±2℃孵育 18~24 小時。

【陽性判斷值】 

請參考本說明書后的“反應(yīng)鑒定表”，表中列出了各種生化反應(yīng)預(yù)期結(jié)果范圍。

【檢驗結(jié)果的解釋】 

試條的判讀 

• 孵育后，根據(jù)判讀表表判讀各反應(yīng)結(jié)果。

• 如果 3 個或 3 個以上測定（GLU 試驗+或-)為陽性結(jié)果，記錄所有自發(fā)反應(yīng)于結(jié)果報告單上并觀察需 要 附加試劑的試驗的結(jié)果：

- TDA 試驗：加 1 滴 TDA 試劑。深褐色為陽性反應(yīng)，記錄于報告單上。 

- IND 試驗：加 1 滴 JAMES 試劑。整個反應(yīng)管出現(xiàn)粉紅色者為陽性，記錄于報告單上。 

- VP 試驗：加 1 滴 VP 1 和 1 滴 VP 2 試劑。至少等待 10 分鐘，出現(xiàn)粉紅或紅色者表明為陽性結(jié)果， 記錄于報告單上。如淺粉紅色在 10 至 12 分鐘內(nèi)出現(xiàn)，判斷結(jié)果為陰性。 注意：吲哚產(chǎn)生試驗必須最后進(jìn)行，因為該反應(yīng)釋放的氣體產(chǎn)物會千擾試條的其他試驗。在加入附加 試劑后，請小心勿調(diào)換培養(yǎng)盒蓋。

• 如果加入附加試劑前陽性結(jié)果（包括 GLU 試驗）的數(shù)量少于 3 個： 

- 重新培養(yǎng) 24 小時（土 2 小時），且不要加任何試劑。

- 重新進(jìn)行需要加入附加試劑的試驗（如前說明）。 

- 為了完成鑒定，可能需要進(jìn)行補充試驗（參考有關(guān)鑒定的段落）。 解釋 鑒定結(jié)果根據(jù)數(shù)值編碼獲得。 

• 數(shù)值編碼的確定： 在結(jié)果報告單，每 3 個試驗為一組，每個陽性試驗分別賦予數(shù)值 1、2 或 4，在每組中，陽性反應(yīng)以相 應(yīng)的數(shù)值相加，由此可得到一個 7 位數(shù)字的編碼。

氧化酶反應(yīng)構(gòu)成第 21 個試驗，如陽性則賦予數(shù)值 4。 

• 鑒定： 鑒定結(jié)果是根據(jù)數(shù)據(jù)庫（V4.1)得到。 *根據(jù)鑒定檢索手冊： 

- 從檢索手冊中查找數(shù)值編碼。 *根據(jù) apiweb TMM鑒定軟件： - 在鍵盤上輸入 7 位數(shù)字的數(shù)值編碼。 在某些情況下，7 位數(shù)字的數(shù)值編碼還不能區(qū)分細(xì)菌，必須進(jìn)行以下一些補充試驗來進(jìn)一步的鑒定： 

- 硝酸鹽還原到亞硝酸鹽(NO2)和氮氣(N2):各加一滴 NIT 1 和 NIT2 試劑于葡萄糖（GLU 管內(nèi)，待 2~3 分 鐘后，紅色表示陽性結(jié)果(NO2)。陰性反應(yīng)（黃色）可能由于還原至 N2 (有時還有氣泡）：加 2-3mg 鋅 粉到葡萄糖（GLU)管，5 分鐘后，如果管保持黃色表示陽性結(jié)果(N2)，記錄于報告單。如果變?yōu)殚偌t， 則是陰性反應(yīng)：仍留在管內(nèi)硝酸鹽被鋅粉還原。該反應(yīng)對檢測革蘭陰性、氧化酶陽性的桿菌有用。 

注意：出于和吲哚試驗同樣的原因（參考“試條的判讀”中的注意項），硝酸鹽還原試驗必須最后進(jìn)行。 

- 動力（MOB):接種一安瓿 APIM 培養(yǎng)基（參見產(chǎn)品說明書）