伊紅美藍培養基(EMB)的使用方法與應用！

一、背景

伊紅美藍培養基(EMB)用于分離革蘭氏陰性腸道菌特別是大腸菌群和糞大腸菌群(GB/T4789.38-2008，GB15979-2002，SN0169-92，化妝品衛生規范2007版和GB5750.12-2006)。

二、原理

當大腸桿菌分解乳糖產酸時細菌帶正電荷被染成紅色，再與美藍結合形成紫黑色菌落，并帶有綠色金屬光澤。而產氣桿菌則形成呈棕色的大菌落。

在堿性環境中不分解乳糖產酸的細菌不著色，伊紅和美藍不能結合，故沙門氏菌等為無色或琥珀色半透明菌落。金葡菌在此培養基上不生長。

常用的伊紅美藍乳糖培養基，可用來鑒別飲用水和乳制品中是否存在大腸桿菌等細菌。如果有大腸桿菌，因其強烈分解乳糖而產生大量的混合酸，菌體帶H+，故菌落被染成深紫色，從菌落表面的反射光中還可以看到金屬光澤。

三、使用方法

1、制作伊紅美藍培養基，趁熱注入培養皿中，凝成平板，待用。

2、用滅過菌的錐形瓶盛取河水或溝水，按1：10稀釋。

3、取0.1毫升稀釋液接種于伊紅美藍培養基上。用平板劃線分離法進行分離。

4、將劃線后的培養皿倒置37℃溫箱中培養18～24小時。培養基中會出現大腸桿菌菌落，菌落中心呈暗藍黑色，發金屬光澤。

5、將菌落接種于斜面培養基上（由營養瓊脂培養基制成）。

四、應用

用于雞大腸桿菌噬菌體的分離鑒定及初步應用研究：

從某大型養雞場采集糞便樣品，分離、純化、鑒定多株大腸桿菌，利用分離純化的大腸桿菌為宿主菌，從糞便中分離對應噬菌體，并對其中一株噬菌體進行生物學特性的測定。

用篩選到噬菌體的所有大腸桿菌菌株，通過飲水、腹腔注射等不同途徑對雞進行攻毒，建立和優化雞大腸桿菌病動物模型。利用相應噬菌體通過口服、腹腔注射等不同方式對雞大腸桿菌病進行治療性試驗，驗證治療效果，為雞大腸桿菌噬菌體的臨床應用提供依據。大腸桿菌的分離鑒定。

從某大型養雞場采集糞便樣品，放入生理鹽水中攪拌，上清經平板劃線法依次在麥康凱瓊脂培養基、伊紅美藍培養基上進行分區劃線，并將得到的單個菌落在伊紅美藍培養基上進行純化。

然后，將純化后的大腸桿菌經革蘭氏染色、微量生化反應進一步鑒定。共從糞便中分離純化20株大腸桿菌，所有菌株在麥康凱瓊脂培養基呈紅色或粉紅色，在伊紅美藍培養基上呈暗紫色且帶有綠色金屬光澤；經革蘭氏染色，光學顯微鏡下拍照觀察，菌體呈紅色、短桿狀；采用細菌微量生化反應管對各菌株進行生化鑒定，顯示各菌株為大腸桿菌。噬菌體的分離鑒定。

以分離的20株大腸桿菌為宿主菌，采用雙層瓊脂平板法從糞便中分離噬菌體，結合液體增殖法將噬菌體進行純化；采用點滴法對所分離噬菌體進行宿主交叉感染試驗；將富集的Bp5、Bp6噬菌體用2%磷鎢酸進行負染，利用透射電鏡觀察噬菌體的形態。

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