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【FACSCelesta實驗應(yīng)用系列】之全血NKT檢測
【實驗概述】
NKT細(xì)胞是一類新型的免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞，在外周血中比例極低，但NKT細(xì)胞能增強(qiáng)免疫反應(yīng)，在抗腫瘤、抗感染、抑制自身免疫病及移植耐受中可發(fā)揮重要作用，因此人全血NKT的檢測在疾病診斷中具有重要作用，流式細(xì)胞儀是檢測NKT最佳方法之一，且NKT在全血中比例較低，全血不破紅直接檢測NKT同時也是判斷流式細(xì)胞儀檢測極低含量細(xì)胞能力的實驗方法之一。
【實驗方法】
①/ 儀器配置
| Flow cytometer | Laser |
| FACSCelesta | 488nm Blue Laser 640nm Red Laser |
②/ 配色方案及流式試劑
● 配色方案
| CD3 | CD56 | CD45 | CD235a |
| FITC | PE | PerCP-Cy5.5 | APC |
● 流式試劑
| Products Name | Catalog No. | Clone | Size | Vol.per.Test |
| BD Pharmingen™ FITC Mouse Anti-Human CD3 | 555332 | UCHT1 | 100 Test | 5ul |
| BD Pharmingen™ PE Mouse Anti-Human CD56 | 555516 | B159 | 100 Test | 5ul |
| BD Pharmingen™ PerCP-Cy™5.5 Mouse Anti-Human CD45 | 564105 | HI30 | 100 Test | 5ul |
| BD Pharmingen™ APC Mouse Anti-Human CD235a | 551336 | GA-R2 (HIR2) | 0.1 mg | 20ul/100ul Whole Blood |
| BD Pharm Lyse™ Lysing Buffer (10x ) | 555899 | 100ml |
【實驗結(jié)果】
人全血中紅細(xì)胞比例最高，可用對應(yīng)抗體CD235a將其區(qū)分，而NKT比例低，在此樣本中，NKT群與其他細(xì)胞群區(qū)分明顯，可清楚區(qū)分開，其比例約為萬分之一，需收集bai萬級別的細(xì)胞數(shù)，但因紅細(xì)胞數(shù)目眾多，以低速（14ul/min）的上樣速度上樣，檢測速度即可達(dá)到18000 events/s左右，所以此試驗同時也驗證了流式細(xì)胞儀在高速高濃度樣本的檢測中的液流穩(wěn)定性及信號丟失率。
* 本資料僅限科研用途使用
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