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色譜柱的關(guān)鍵內(nèi)容是制備出高效的填料，這些填料制成的色譜柱既要有好的選擇性，又要有高的柱效，要提高柱效是現(xiàn)代高效液相色譜的又一關(guān)鍵問題。
但是色譜填料的選擇范圍很寬，有聚合物基質(zhì)填料、硅膠基質(zhì)填料和其它無機(jī)填料。所以要選擇合適的色譜填料，必須對此有一定的認(rèn)識和了解。
色譜柱填料應(yīng)該如何選擇和裝填？咱們細(xì)細(xì)來講。
1、硅膠基質(zhì)填料
硅膠是HPLC填料普遍常用的基質(zhì)。除了具有無機(jī)物基質(zhì)共有的高強(qiáng)度，還提供了一個(gè)良好得表面，可以通過成熟的硅烷化技術(shù)鍵合范圍很廣的配基，制成反相、離子交換、疏水作用、親水作用或分子排阻填料。硅膠基質(zhì)填料適用廣泛的溶劑，從極性到非極性。其缺點(diǎn)是在水溶性堿性流動(dòng)相中不穩(wěn)定。通常，硅膠基質(zhì)的填料推薦的常規(guī)分析pH范圍為2～8。
2、聚合物填料
聚合物填料多為聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸脂等，其優(yōu)點(diǎn)是在PH值為1～14均可使用。相對于硅膠基質(zhì)的C18填料，這類填料具有較強(qiáng)的疏水性，而且大孔的聚合物對蛋白質(zhì)等樣品的分離非常有效。其缺點(diǎn)是相對硅膠基質(zhì)填料，色譜柱柱效較低。
3、其他無機(jī)填料
其它HPLC的無機(jī)填料色譜柱也已經(jīng)商品化由于其特殊的性質(zhì)，一般僅限于特殊的用途。
如石墨化碳黑正逐漸成為反向色譜柱填料。這種填料的分離不同于硅膠基質(zhì)烷基鍵合相，石墨化碳的表面即是保留的基礎(chǔ)，不再需其它的表面改性。該柱填料一般比烷基鍵合相硅膠或多孔聚合物填料的保留能力更強(qiáng)。石墨化碳可用于分離某些幾何異構(gòu)體，由于在HPLC流動(dòng)相中不會(huì)被溶解，這類柱可在任何PH與溫度下使用。氧化鋁也可以用于HPLC。氧化鋁微粒剛性強(qiáng)，可制成穩(wěn)定的色譜柱柱床，其優(yōu)點(diǎn)是可以在pH高達(dá)12的流動(dòng)相中使用。但由于氧化鋁與堿性化合物的作用也很強(qiáng)，應(yīng)用范圍受到一定限制，所以未能廣泛應(yīng)用。
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