Oxoid抗微生物藥物敏感性試驗紙片操作流程

操作流程：

提供的材料：Oxoid抗微生物藥物敏感性試驗紙片。

需要但沒有提供的材料：用適當(dāng)培養(yǎng)基制成的瓊脂平板、接種用的混懸培養(yǎng)基、無菌接種環(huán)和拭子、無菌鑷子、麥?zhǔn)蠞岫葮?biāo)準(zhǔn)液、培養(yǎng)箱、改良的氣體環(huán)境、抗生素紙片分配器、質(zhì)控菌種、測量抑菌環(huán)大小的裝置和當(dāng)?shù)貥?biāo)準(zhǔn)方法的判讀標(biāo)準(zhǔn)。

方法：Oxoid藥敏紙片可能會與各種標(biāo)準(zhǔn)檢測方法一起使用，包括但不限于BSAC、CDS、DIN、CLSI M2或EUCAST，請參見現(xiàn)行的當(dāng)?shù)刂改希檎姨囟ㄐ畔ⅲ缤扑]的培養(yǎng)基、接種物濃度水平和培養(yǎng)條件等。

質(zhì)控程序：建議以適當(dāng)?shù)拈g隔檢測質(zhì)控菌株，可以在每次做試驗時進(jìn)行，也可以根據(jù)國家標(biāo)準(zhǔn)機(jī)構(gòu)提供的抗生素敏感性檢測指南推薦的程序。如果質(zhì)控微生物對特定抗生素的檢查結(jié)果在規(guī)定的范圍以外，不得報告患者的檢查結(jié)果，并不得使用該藥敏紙片，直至確定了產(chǎn)生這種不一致結(jié)果的原因（例如培養(yǎng)基、灌裝量、接種物、培養(yǎng)條件、質(zhì)控菌株或者藥敏紙片儲存或使用不正確）。

限制：本產(chǎn)品供體外診斷使用，僅用于指示供試微生物的體內(nèi)敏感性。選擇何種抗微生物藥物進(jìn)行測試和報告必須由每個臨床實驗室來決定。臨床醫(yī)生負(fù)責(zé)決定使用何種抗生素對抗供試微生物，同時應(yīng)考慮可能影響藥物體內(nèi)活性的其它因素。

臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會（CLSI）方法小結(jié)（其它標(biāo)準(zhǔn)有所不同）：培養(yǎng)基：Mueller-Hinton瓊脂用于檢測非苛養(yǎng)微生物。Mueller-Hinton加5%綿羊血用于檢測腦膜炎奈瑟氏菌和鏈球菌，GC瓊脂加1%規(guī)定的生長添加劑用于檢測淋病奈瑟氏菌。嗜血桿菌檢測培養(yǎng)基用于檢測流感嗜血桿菌和副流感嗜血桿菌。其它苛養(yǎng)菌或很少檢測的細(xì)菌所用的培養(yǎng)基和檢測條件可在CLSI M45中找到。平板和藥敏紙片在使用前要在室溫下平衡。平板在接種細(xì)菌前不應(yīng)太潮濕。

供試微生物：采取適當(dāng)?shù)臋z測方法來核實供試微生物的推測鑒定結(jié)果。采用直接菌落法或生長法制備標(biāo)準(zhǔn)化的接種物并在制備好的15分鐘內(nèi)接種到平板上：生長法－用接種環(huán)蘸取3至5個形態(tài)上相似的菌落，并將其轉(zhuǎn)移到4-5 ml的胰蛋白胨大豆肉湯或

類似培養(yǎng)基中。在35℃下培養(yǎng)2-6小時。用無菌鹽水或肉湯調(diào)整濁度，使?jié)岫鹊扔?.5 麥?zhǔn)蠞岫葮?biāo)準(zhǔn)（制備0.5 麥?zhǔn)蠞岫葮?biāo)準(zhǔn)液：將0.5 ml的0.048M 氯化鋇[1.175% 重量/體積 BaCl₂ ·2H₂O]加入99.5 ml 0.18 mol/l硫酸[1% 體積/體積]中－將這一標(biāo)準(zhǔn)液置于暗處）。直接菌落法（葡萄球菌和鏈球菌的方法）－從非選擇性瓊脂上挑取分離的菌落，加入無菌鹽水或肉湯中，并制成等于0.5 麥?zhǔn)蠞岫葮?biāo)準(zhǔn)的菌懸液。

接種：將無菌拭子浸入菌懸液中，對著試管壁旋轉(zhuǎn)按壓，擠出多余的液體。沿著至少三個方向涂布平板表面。應(yīng)在接種的15分鐘內(nèi)將藥敏紙片放到平板上。

藥敏紙片：使用前要將藥敏紙片放置于室溫下。每塊平板推薦的試驗藥敏紙片數(shù)量如下：

在貼上藥敏紙片的15分鐘內(nèi)翻轉(zhuǎn)平板，并按照下面的規(guī)定培養(yǎng)

*葡萄球菌和腸球菌需要培養(yǎng)24小時。耐甲氧西林的葡萄球菌可能在溫度超過35℃的條件下檢測不出來。

判讀：培養(yǎng)后，測量細(xì)菌生長*抑制區(qū)域的直徑，到mm。抑菌環(huán)的邊緣應(yīng)為肉眼可以發(fā)現(xiàn)的無明顯微生物生長的區(qū)域。血平板的結(jié)果利用反射光從平板的上表面讀取（不用讀取溶血環(huán)的邊緣，而是細(xì)菌生長的邊緣）。所有其它培養(yǎng)基要使用黑色背景和反射光從平板的背面判讀（葡萄球菌和腸球菌除外，它們采用投射光讀取－有微弱的生長表明有耐藥性）。如果是變形桿菌，忽略在明顯的抑菌環(huán)上生長的一層薄薄菌膜。對結(jié)果進(jìn)行判讀的完整說明可依照CLSI方法，請參考現(xiàn)行的CLSI M100標(biāo)準(zhǔn)。下表只詳細(xì)說明了在CLSI標(biāo)準(zhǔn)中的那些藥物/濃度。與其它標(biāo)準(zhǔn)方法一起使用的其它藥物和濃度可從Oxoid獲得，但沒有在本說明書中詳細(xì)列出。

*部分摘自CLSI文件M100-S20（M02-A10）：“藥敏紙片擴(kuò)散法補充表”抗微生物藥物敏感性試驗性能標(biāo)準(zhǔn)。可從臨床和實驗室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會（940 West Valley Road, Suite 1400, Wayne, PA 19807）獲得完整的標(biāo)準(zhǔn)。