藥品檢測實驗室日常工作都會圍繞藥典規定的方法展開，藥典改版也是備受大家關注。本文通過圖示和比對的方式，對2020版《中國藥典》1105章節非無菌產品微生物限度檢查：微生物計數法 的內容和15版藥典進行比較，希望對大家有所幫助！

 微生物計數法流程圖示

15版藥典與20版藥典內容對比

【15版】......當本法用于檢查非無菌制劑及其原、輔料等是否符合相應的微生物限度標準時，應按下述規定進行檢驗，包括樣品的取樣量和結果的判斷等。

【20版】......當本法用于檢查非無菌制劑及其原、輔料等是否符合相應規定的微生物限度標準時，應按下述規定進行檢驗，包括樣品的取樣量和結果的判斷等。

【15版】......單向流空氣區域、工作臺面及環境應定期進行監測。

【20版】......單向流潔凈空氣區域、工作臺面及環境應定期進行監測。

【15版】菌液制備：

取黑曲霉的新鮮培養物加入3~5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或0.9%無菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫。然后，采用適宜的方法吸出孢子懸液至無菌試管內，用含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或0.9%無菌氯化鈉溶液制成適宜濃度的黑曲霉孢子懸液。

【20版】菌液制備：

取黑曲霉的新鮮培養物加入3~5ml適量含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液，將孢子洗脫。然后，采用適宜的方法吸出孢子懸液至無菌試管內，用含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液或含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液制成適宜濃度的黑曲霉孢子懸液。

【15版】微生物計數用的成品培養基、由脫水培養基或按處方配置的培養基均應進行培養基適用性檢查。

【20版】微生物計數用的成品商品化的預制培養基、由脫水培養基或按處方配置的培養基均應進行培養基適用性檢查。

【15版】

...... 1.供試液制備......

【20版】

取消序號

（4）需用特殊方法制備供試液的供試品

【15版】氣霧劑，噴霧劑供試品   取供試品，置-20℃或其他適宜溫度冷凍約1小時，取出，迅速消毒供試品開啟部位，用無菌鋼錐在該部位鉆一小孔，放至常溫，并輕輕轉動容器，使拋射劑緩緩全部釋出。供試品亦可采用其他適宜的方法取出。用無菌注射器從每一容器中吸出藥液于無菌容器中混合，然后取樣檢測。

【20版】氣霧劑，噴霧劑供試品   取供試品，置-20℃或其他適宜溫度冷凍約1小時，取出，迅速消毒供試品開啟部位或閥門，正置容器，用無菌鋼錐或針樣設備在該部位與閥門結構相匹配的適宜位置鉆一小孔，放至常溫供試品各容器的鉆孔大小和深度應盡量保持一致，拔出鋼錐時應無明顯拋射劑拋出，并輕輕轉動容器，使拋射劑緩緩全部釋出。亦可采用專業設備釋出拋射劑。釋放拋射劑后再無菌開啟容器，并將供試品轉移至無菌容器中混合，必要時用沖洗液沖洗容器內壁。供試品亦可采用其他適宜的方法取出。用無菌注射器從每一容器中吸出藥液于無菌容器中混合，然后取樣檢測。

【15版】 貼膏劑供試品   取供試品，去掉防粘層，將粘貼面朝上放置在無菌玻璃或塑料器皿上，在粘貼面上覆蓋一層適宜的無菌多孔材料（如無菌紗布），避免貼膏劑粘貼在一起。將處理后的貼膏劑放入盛有適宜體積并含有表面活性劑（如聚山梨酯80或卵磷脂）稀釋液的容器中，震蕩至少30分鐘。必要時，用同一稀釋液將供試品進一步10倍系列稀釋。

【20版】貼劑，貼膏劑供試品   取供試品，去掉防粘層，將粘貼面朝上放置在無菌玻璃或塑料器皿上，在粘貼面上覆蓋一層適宜的無菌多孔材料（如無菌紗布），避免貼膏劑供試品粘貼在一起。將處理后的貼膏劑供試品放入盛有適宜體積并含有表面活性劑（如聚山梨酯80或卵磷脂）稀釋液的容器中，震蕩至少30分鐘。必要時，用同一稀釋液將供試品進一步10倍系列稀釋。

【15版】

2.接種和稀釋

按下列要求進行供試液的接種和稀釋，制備微生物回收試驗用供試液。

【20版】

2.接種和稀釋

按表1規定及下列要求進行供試液的接種和稀釋，制備微生物回收試驗用供試液。

【15版】

2.菌液對照組

【20版】

取消序號

【15版】

3.抗菌活性的去除或滅活

......若使用中和劑或滅活劑，實驗中應設中和劑或滅活劑對照組，即取相應量稀釋液替代供試品同實驗組操作，以確認其有效性和對微生物無毒性。...

【20版】

3.抗菌活性的去除或滅活

......若使用中和劑或滅活劑，實驗中應設中和劑或滅活劑對照組，即取相應量含中和劑或滅活劑的稀釋液替代供試品同實驗組操作，以確認其有效性和對微生物無毒性。......

【15版】涂布法 取15-20ml溫度不超過45℃的胰酪大豆胨瓊脂培養基或沙氏葡萄糖瓊脂培養基

【20版】涂布法 取15-20ml適量（通常為15-20ml）溫度不超過45℃的胰酪大豆胨瓊脂培養基或沙氏葡萄糖瓊脂培養基

【15版】 薄膜過濾法  總沖洗量不得超過1000ml，以避免濾膜上的微生物受損傷。

【20版】 薄膜過濾法  總沖洗量一般不超過500ml，多不得超過1000ml，以避免濾膜上的微生物受損傷。

【15版】 MPN法   接種管置30~35℃培養3天，逐日觀察各管微生物生長情況。如果由于供試品的原因使得結果難以判斷，可將該管培養物轉種至胰酪大豆胨液體培養基或胰酪大豆胨瓊脂培養基，在相同條件下培養1~2天，觀察是否有微生物生長。根據微生物生長的管數從表3查被測供試品每1g或每1ml中需氧菌總數的可能數。

【20版】 MPN法   接種管置30~35℃培養不超過3天，逐日觀察各管微生物生長情況。如果由于供試品的原因使得結果難以判斷，可將該管培養物轉種至胰酪大豆胨液體培養基或胰酪大豆胨瓊脂培養基，在相同條件下培養1~2天，觀察是否有微生物生長。根據微生物生長的管數從表3查被測供試品每1g，1ml或10cm²每1ml中需氧菌總數的可能數。

【15版】 表3  微生物可能數檢索表

每管含樣品的g或ml數

MPN/g或ml

注：表內所列檢驗量如改用1g（或ml）、0.1g（或ml）、和0.01g（或ml）時，表內數字應相應降低10倍；改用0.01g（或ml）、0.001g（或ml）、和0.0001g（或ml）時，表內數字應相應增加10倍，其余類推。

【20版】 表3  微生物可能數檢索表

每管含樣品的g，ml或ml10cm²數

MPN/g，ml或ml10cm²數

注：表內所列檢驗量如改用1g（或ml、10cm²）、0.1g（或ml、10cm²）、和0.01g（或ml、10cm²）時，表內數字應相應降低10倍；改用0.01g（或ml、10cm²）、0.001g（或ml、10cm²）、和0.0001g（或ml、10cm²）時，表內數字應相應增加10倍，其余類推。

【15版】 檢驗量 除另有規定外，一般供試品的檢驗量為10g或10ml；膜劑為100cm²；貴重藥品，微量包裝藥品的檢驗量可以酌減。檢驗時，應從2個以上小包裝單位中抽取供試品，大蜜丸還不得少于4丸，膜劑還不得少于4片。

【20版】 檢驗量 除另有規定外，一般供試品的檢驗量為10g或10ml；膜劑、貼劑、貼膏劑為100cm²；貴重藥品，微量包裝藥品的檢驗量可以酌減。檢驗時，應從2個以上小包裝單位中抽取供試品，大蜜丸還不得少于4丸，膜劑、貼劑、貼膏劑還不得少于4片。

貴重藥品、微量包裝藥品的檢驗量可以酌減。若供試品處方中每一劑量單位(如片劑、膠囊劑)活性物質含量小于或等于1mg,或每1g或每1ml(指制劑)活性物質含量低于1mg時,檢驗量應不少于10個劑量單位或10g或10ml供試品；若樣品量有限或批產量極小(如:小于1000ml或1000g)的活性物質供試品,除另有規定外,其檢驗量少為批產量的1%檢驗量更少時需要進行風險評估；若批產量少于200的供試品,檢驗量可減少至2個單位；批產量少于100的供試品,檢驗量可減少至1個單位。

【15版】 供試品檢查3.MPN法

取規定量供試品，按方法適用性試驗確認的方法進行供試液制備和供試品接種，所有試驗管在30~35℃培養3~5天，如果需要確認是否有微生物生長，按方法適用性試驗確定的方法進行。記錄每一稀釋級微生物生長的管數，從表3查每1g或1ml供試品中需氧菌總數的可能數。

【20版】 供試品檢查3.MPN法

取規定量供試品，按方法適用性試驗確認的方法進行供試液制備和供試品接種，所有試驗管在30~35℃培養3~5天，如果需要確認是否有微生物生長，按方法適用性試驗確定的方法進行。記錄每一稀釋級微生物生長的管數，從表3查每1g或、1ml或10cm²供試品中需氧菌總數的可能數。

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