多肽是一種與生物體內各種細胞功能都相關的生物活性物質,它的分子結構介于氨基酸和蛋白質之間,是由多種氨基酸按照一定的排列順序通過肽鍵結合而成的化合物。多肽是涉及生物體內各種細胞功能的生物活性物質的總稱,常常被應用于功能分析、抗體研究、尤其是藥物研發等領域。多肽合成技術的出現,讓這些多肽的應用領域變得更寬。
多肽的固相合成
多肽的合成是氨基酸重復添加的過程,通常從C端向N端(氨基端)進行合成。多肽固相合成的原理是將目的肽的個氨基酸C端通過共價鍵與固相載體連接,再以該氨基酸N端為合成起點,經過脫去氨基保護基和過量的已活化的第二個氨基酸進行反應,接長肽鏈,重復操作,達到理想的合成肽鏈長度,后將肽鏈從樹脂上裂解下來,分離純化,獲得目標多肽。
1、Boc多肽合成法
Boc方法是經典的多肽固相合成法,以Boc作為氨基酸α-氨基的保護基,芐醇類作為側鏈保護基,Boc的脫除通常采用三(TFA)進行。多肽合成時將已用Boc保護好的N-α-氨基酸共價交聯到樹脂上,TFA切除Boc保護基,N端用弱堿中和。
肽鏈的延長通過二環己基碳二亞胺(DCC)活化、偶聯進行,終采用強酸(HF)法或三氟甲磺酸(TFMSA)將合成的目標多肽從樹脂上解離。在Boc多肽合成法中,為了便于下一步的多肽合成,反復用酸進行脫保護,一些副反應被帶入實驗中,例如多肽容易從樹脂上切除下來,氨基酸側鏈在酸性條件不穩定等。
2、Fmoc多肽合成法
Carpino和Han以Boc多肽合成法為基礎發展起來一種多肽固相合成的新方法——Fmoc多肽合成法。
Fmoc多肽合成法以Fmoc作為氨基酸α-氨基的保護基。其優勢為在酸性條件下是穩定的,不受TFA等試劑的影響,應用溫和的堿處理可脫保護,所以側鏈可用易于酸脫除的Boc保護基進行保護。
肽段的后切除可采用TFA/二氯甲烷(DCM)從樹脂上定量完成,避免了采用強酸。同時,與Boc法相比,Fmoc法反應條件溫和,副反應少,產率高,并且Fmoc基團本身具有特征性紫外吸收,易于監測控制反應的進行。Fmoc法在多肽固相合成領域應用越來越廣泛。
多肽合成服務種類
多肽合成服務通常有線性肽合成服務、多種難肽合成服務、修飾肽合成服務、以及部分多肽合成公司還會提供多肽定制服務,定制出有針對性的合成肽。
目前有多肽合成公司提供的線性肽合成可達150個氨基酸以內,在修飾肽合成上,能提供常見修飾,磷酸肽,RGD環肽,熒光標記肽(Cy3、Cy5、Fitc、AMC等),生物素標記肽/復合抗原(MAP)/含D型氨基酸,及各種氨基酸衍生物均可合成。
多肽產物純度選擇
常見的質譜級多肽純度,一般要求>95%
用于抗體篩選純度,一般>85%即可
NMR和結晶試驗中,純度一般>98%
粗品肽,一般>50%即可用于多肽篩選
多肽分類
多肽修飾分類
C端酰胺化(Amidation,C-termainal)
醛基化(Aldehydes)
醇基化(Alcohols)
pNA (p-Nitroanilide)
AMC
C端標記技術
AFC
巰基乙胺化(Cysteamide)
酯基化(Ester)
N-烷基化(N-Alkyl Amides)
N端標記技術
乙酰化Acetylated (Acetylated)
Palmytolyl
HYNIC
生物素標記(Biotinylated)
Br乙酰化(Bromoacetylated)
螯合反應(DOTA,DTPA conjugated)
甲醛化(Formylated)
十四烷基,十八烷基化(Myristoylated)
琥珀酰化、棕櫚酸化、蘋果酸化、脂肪酸化等(Succinylated)
熒光標記修飾
C端修飾: AFC, AMC, Dap(Dnp), Lys(Dye), pNA, Rh110
N端修飾: Bodipy-FL, Cy3, Cy5, Texas Red, 5-Tamra, 5-lodoacetamido fluorescein Rhodamine 110 and Rhodamine B Luciferin, EDANS FAM, FITC, MCA, Rox, Sulforhodamine 101, 5-TAMRA
環化反應
首尾成環,中間成環,特殊成環(N -> C or Head to Tail)
2對二硫鍵,3對二硫鍵(Disulfide (S-S bond formation) .Trisulfide formation)
天然產物活性肽成環(Cyclic-natural peptides )
甲基化修飾
側鏈甲基化Lys(For),Lys(Me), Lys(Me)2, Lys(Me)3, Arg(Me)2 symmetrical, D-Tyr(Me),D-Tyr(Et)
N端甲基化(N-Me-Arg,N-Me-Asp, N-Me-Glu, N-Me-Leu, N-Me-Nle, N-Me-Nva, N-Me-Phe, N-Me-S N- Me-Ser, N-Me-Trp, N-Me-Thr, N-Me-Val)
幾種特殊修飾
各種偶聯(BSA, KLH conjugated peptides for antibody production
磷酸化(Phosphoserine, Phosphothreonine, Phosphotyrosine)
磺化(Sulfated Tyrosine or Serine)
MAPS (Multiple Antigenic Peptide)
糖肽(Glycopeptides)
PEG修飾(PEGylation)
國肽生物按照客戶定制要求供應高品質普通多肽。
我們擁有成熟的多肽合成純化方法,利用SPPS方法和液相合成方法為客戶提供高品質多肽。我們的服務特點是:
1. 純度:我們提供粗品肽和純度純度為70%,75%,80%,85%,90%,95%,98%,99%的純品多肽。
2.脫鹽和轉鹽:根據客戶要求,我們可以對多肽進行脫TFA鹽處理,也可以轉為醋酸鹽。
3.交貨期限:30個氨基酸之內,一般2-3周,1-2周。
4.質量控制:每條多肽都免費提供合格的HPLC,MS和COA文件。
5.售后服務:1-2周內可以提出異議,我們免費復測,不合格免費退貨,1-3個月內使用不合格可以免費提供復測,樣品免費保存3個月。
國肽生物根據客戶要求,供應各種修飾型多肽。
1.磷酸化的Ser、Tyr和Thr修飾的多肽:我們提供單磷酸化和多磷酸化多肽服務,目前我們已經能夠提供四個磷酸化位點修飾的多肽。
2.5(6)-FAM,FITC,CY5,RhodamineB,PNA,EDNAS/dabcyl等熒光標記修飾的多肽:熒光標記修飾多肽技術是我們國肽生物的代表性多肽合成技術,我們的這項技術已經相當成熟。
3.生物素Biotin,Lys(Biotin)修飾的多肽:生物素是維生素B2的組成部分,Biotin,Lys(Biotin)修飾的多肽也是客戶經常定制的多肽。我們提供生物素修飾的多肽已經有將近100%的成功率。
4.含有一對或多對二硫鍵修飾的多肽:二硫鍵在蛋白質的結構穩定中起到重要作用,目前我們已經能夠為客戶提供四對二硫鍵修飾的多肽。
5.含有同位素C13,N15修飾的多肽:同位素標記的多肽主要應用于醫學和生物學領域,通常價格較高,為了滿足客戶需要,我們接受微克級的同位素多肽定制。
6.含有特殊氨基酸修飾的多肽:例如,D型氨基酸,氨基酸衍生物,脂肪族羧酸等等,都在我們接受的定制范圍內。
國肽生物提供150個氨基酸以內的長肽合成服務。
多肽合成過程中,肽鏈過長時,經常會出現缺殘基,氨基酸縮合困難等情況,基于這些現象,我們開發了三種有效提高反應成功率的方案:
1. 微波合成法:對于合成過程中出現的一些難以縮合的氨基酸,我們采用微波法進行合成,該方法*,并且大大縮短了反應時間。
2. 片段合成法:當某些多肽用常規合成方法合成困難,我們也會采用將多肽中某一段的某幾個氨基酸縮合之后作為一個整體縮合到肽鏈上去,這種方法也能夠解決許多合成中存在的問題。
3.酰肼合成法:酰肼法合成多肽的方法是將固相合成的 N末端Cys 多肽和 C末端多肽酰肼之間的化學選擇性反應形成酰胺鍵而實現多肽的連接,該方法根據肽鏈中Cys的位置,將整條肽鏈分成多條序列分別合成,終經過液相縮合反應得到目標肽,顯著地提高了終產物純度,廣泛適用于含有Cys的長鏈多肽的合成。
國肽生物擁有成熟的長肽合成工藝,能夠根據客戶定制的多肽序列,快速有效地設計合成方案并迅速開始合成,更快更好的為客戶提供所需的服務是我們不變的堅持。
國肽生物主要提供:多肽合成、多肽定制、同位素標記肽、人工胰島素、磷酸肽、生物素標記肽、熒光標記肽(Cy3、Cy5、Fitc、AMC等)、目錄肽、偶聯蛋白(KLH、BSA、OVA等)、美容肽、化妝品肽、多肽文庫構建、抗體服務、糖肽、訂書肽、藥物肽、RGD環肽等。詳情請咨詢國肽生物
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