要使elisa試劑盒供應商測定得到的成果，不論是定性的仍是定量的，必須嚴厲依照規則的辦法制備試劑和施行測定。首要試劑的制備關鍵已如前述，其他一般性試劑，如包被緩沖液、洗刷液、標本稀釋液、結合物稀釋液、底物工作液和酶反響停止液等，時不行掉以輕心。緩沖液可于冰箱中短期保存，運用前應調查是否蛻變。蒸餾水的質量在ELISA中也至關重要，運用新鮮重蒸餾的。不合格的蒸餾水可使空白值升高。
測定的施行中，應力求各個過程操作的標準化，下面以板式ELISA為例，介紹有關留意事項。
（一）ELISA試驗加樣
在ELISA中除了包被外，一般需進行45加樣。在定性測定中有時不強調加樣量的性，例如規則為加樣一滴。此刻應該運用相同口徑的滴管，堅持的加樣姿態，使每滴液體的體積根本相同。在定量測定中則加樣量應力求。標本和結合物的稀釋液應按規則。加樣時應將液體加在孔底，防止加在孔壁上部，并留意不行出現氣泡。
（二）ELISA試驗保溫
在ELISA中一般有二次抗原抗體反響，即加標本后和加結合物后，此刻反響的溫度和時刻應按規則的要求，保溫容器是水浴箱，可使溫度迅速平衡。各ELISA板不該疊在一起。為防止蒸騰，板上應加蓋，或將板平放在底部墊有濕紗布的濕盒中。濕盒應該是金屬的，傳熱簡單。如用保溫箱，空濕盒應預先放在其間，以平衡溫度，這在室溫較低時更為重要。參加底物后，反響的時刻和溫度一般不做嚴厲要求。如室溫高于20℃，ELISA板可避光放在試驗臺上，以便不時調查，待對看管顯色適其時，即可停止酶反響。