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西美杰*病毒包裝方案:五大流程,一個對策!

來源:北京西美杰科技有限公司   2018年01月24日 11:30  

西美杰*病毒包裝方案:五大流程,一個對策!

     不論是細胞治療還是基因治療都離不開病毒載體。目前使用zui多的病毒載體類型包括:腺相關病毒(AAV)、慢病毒(Lv)、逆轉錄病毒(Rv)和腺病毒(Adv)等,這些常用病毒載體特性如下圖所示:

特征

慢病毒
Lentivirus

逆轉錄病毒
Retrovirus

腺相關病毒
AAV

腺病毒
ADV

基因表達

穩轉/瞬轉

穩轉

瞬轉

瞬轉

是否能感染可分裂的細胞

是否能感染不分裂的細胞

是否能整合到靶細胞基因組

靶細胞的免疫反應

較低

非常低

病毒滴度

+++

++

+++

++++

轉染效率

+++

++

+++

++++



因此在選擇病毒載體時,除了要考慮載體自身特征之外,如何包裝并獲取高滴度高活性的病毒載體對后續實驗至關重要,針對病毒載體制備5大環節,小美為您推薦如下解決方案↓



1. 病毒載體包裝質粒系統
西美杰代理的美國Cell Biolabs公司推出的病毒包裝系統可滿足多種重組病毒包裝需求,包括四大類型病毒包裝質粒AAV Helper Free System、ViraSafe™ Lentivirus Expression Complete Systems、Platinum Retroviral Expression Systems以及RAPAd® Adenoviral Expression Systems等。更多病毒包裝質粒系統介紹請點這里。

 

2. 病毒包裝試劑

A. 病毒包裝轉染試劑
西美杰代理的美國Mirus公司新推出的病毒包裝轉染試劑TransIT®-VirusGEN™與TransIT®-Lenti系列,專門針對AAV和Lentivirus設計,相比傳統轉染方法能獲得更高的轉染效率和病毒滴度,無動物源成分且兼容多種病毒包裝系統及不同細胞系類型。

品名

貨號

規格

適用病毒類型

TransIT®-VirusGEN™ Transfection Reagent

MIR 6703

0.3/0.75/1.5mL

AAV & Lentivirus

TransIT®-Lenti Transfection Reagent

MIR 6603

0.3/0.75/1.5mL

Lentivirus

 

B. Lv/Rv包裝效率增強劑Lentivirus/Retrovirus 10X Titer-Up
西美杰*代理的101Bio品牌Lentivirus/Retrovirus 10X Titer-Up用于重組慢病毒或逆轉錄病毒包裝過程,可促進病毒基因組轉錄和RNA穩定,使轉染效率提高10倍左右。

品名

貨號

規格

適用病毒類型

Lentivirus 10X Titer-Up

P906

1 mL

Lentivirus

Retrovirus 10X Titer-Up

P909

1 mL

Retrovirus

 

C. AAV/Adv病毒釋放液Virus-High® AAV/ADV Release Solution
西美杰*代理的101Bio品牌Virus-High® AAV/ADV Release Solution是一款無需反復凍融,即可從細胞中快速收獲AAV/Adv病毒以及其他非分泌型無囊膜病毒的試劑。

品名

貨號

規格

適用病毒類型

Virus-High® AAV / Adv Release Solution

P900

10 mL

AAV & Adv

 

3. 快速病毒濃縮試劑與純化試劑盒
西美杰*代理的美國Cali-bio和Cell Biolabs品牌專門針對病毒載體設計的重組病毒濃縮純化試劑(盒),在獲得重組病毒高回收率的同時大大簡化操作流程,無需超速離心設備,是中小規模樣本純化的方案。

重組病毒類型

品名

貨號

特點

逆轉錄病毒
(Retrovirus)

Retrovirus Concentration Solution(5×)
逆轉錄病毒濃縮試劑

CB300904

無需超速離心;
1小時內病毒濃縮10-100倍;
濃縮后病毒適用于各種細胞;

慢病毒
(Lentivirus)

Lentivirus Concentration Solution(5×)
慢病毒濃縮試劑

CB300905

ViraBind™ Lentivirus Purification Kit

VPK-104

操作時間< 2h,無需超速離心;

回收率>90%,純化效果與CsCl方法相當

腺相關病毒
(AAV)

ViraBind™ AAV Purification Kit
(適用樣本量為2個10cm皿或1個15cm皿收獲的上清)

VPK-140

適用于純化AAV-2與AAV-DJ;
操作時間約3h;

ViraBind™ AAV Purification Mega Kit
(一次處理樣本量可達10個15cm皿收獲的上清)

VPK-141

獲得AAV純度>95%,回收率>60%

腺病毒
(ADV)

ViraBind™ Adenovirus Miniprep Kit
(適用樣本量為1個T75瓶或1個10cm皿收獲的上清)

VPK-099

采用特殊濾膜和離心柱;
操作時間約30min,無需超速離心;

ViraBind™ Adenovirus Purification Kit
(適用樣本量約為4個T75瓶收獲的上清)

VPK-100

回收率>90%,純化效果與CsCl方法相當

 

4. 病毒滴度檢測試劑盒
測定重組病毒滴度是提高下游實驗可控性,重復性和準確性的前提,西美杰代理的Cell Biolabs品牌針對不同病毒載體的特性分別設計的了多種滴度測定試劑盒,并且兼容了和的測定方法。

重組病毒類型

品名

貨號

特點

慢病毒
(Lentivirus)

Lentivirus Rapid Quantitation Kit

VPK-112

快速定量,操作過程45-60min;
熒光法檢測病毒核酸濃度定量病毒滴度,純化前或純化后樣品都可檢測;
靈敏度:1010個病毒粒子/mL或100ul純化前上清

Lentivirus-Associated p24 ELISA Kit

VPK-107

Pull-down技術分離出病毒相關P24蛋白,去除游離P24蛋白;
ELISA方法定量有活性的重組慢病毒滴度,避免傳統方法檢測總P24蛋白導致的誤差

Traditional p24 ELISA Kit

VPK-108-H

ELISA方法檢測總P24蛋白定量慢病毒滴度

逆轉錄病毒
(Retrovirus)

QuickTiter™ Retrovirus Quantitation Kit

VPK-120

快速定量,操作過程45-60min;
熒光法檢測病毒核酸濃度定量病毒滴度,純化前或純化后樣品都可檢測;
靈敏度:1.5×109個病毒粒子/mL或100ul純化前上清

腺相關病毒
(AAV)

QuickTiter™ AAV Quantitation Kit

VPK-145

快速定量,操作過程<2h;
熒光法檢測病毒核酸濃度定量病毒滴度;
靈敏度:純化前AAV可達109 GC/mL,對于純化后AAV可達5×1010 GC/mL

腺病毒
(ADV)

QuickTiter™ Adenovirus Quantitation Kit

VPK-106

快速定量,操作過程45-60min;
熒光法檢測病毒核酸濃度定量病毒滴度,純化前或純化后樣品都可檢測;
靈敏度:1010個病毒粒子/mL或100ul純化前上清

QuickTiter™ Adenovirus Titer Immunoassay Kit

VPK-109

無需空斑形成實驗,避免復雜的鋪瓊脂步驟,操作更簡便;
傳統方法10天才可完成的實驗,用該試劑盒僅需2.5天,有ELISA和ICC兩種方法供選擇;

QuickTiter™ Adenovirus Titer ELISA Kit

VPK-110

可用于所有41個血清型的腺病毒



5. 病毒感染增強試劑
西美杰代理的Cell Biolabs品牌還針對不同病毒載體研發了促病毒感染試劑,能顯著提高病毒對靶細胞的感染,進而提高基因表達效率。

品名

貨號

規格

特點

ViraDuctin™ Lentivirus Transduction Kit

LTV-200

40 次

復合型試劑能與慢病毒或逆轉率病毒形成復合物,與Polybrene®相比病毒感染效率可提高2-6倍,適用于原代細胞和干細胞

LTV-201

200次

ViraDuctin™ Retrovirus Transduction Kit

RV-200

40次

RV-201

200次

ViraDuctin™ AAV Transduction Kit

AAV-200

10次

有效提高重組AAV在多種細胞內的轉染效率,包括傳統方法轉導效率低的細胞和非分裂細胞,如原代細胞和干細胞。該試劑使用方便,僅需2h,是AAV轉染非分裂細胞的。

AAV-201

50次

ViraDuctin™ Adenovirus Transduction Reagent

AD-200

10次

該試劑讓重組腺病毒感染不依賴于細胞的CAR(柯薩奇病毒-腺病毒受體)水平,可顯著提高病毒感染低CAR或無CAR表達的細胞,如原代細胞或干細胞,還可提高轉入基因的表達效率

AD-201

50次

 

如果您對上述方案感興趣,歡迎隨時登錄北京西美杰www.xmjsci。。com查詢相關產品或西美杰全國,小美期待您的垂詢。

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