酵母菌是基因表達研究和重組蛋白生產的通用宿主。然而,傳統酶解法進行酵母mRNA和內容蛋白提取通常非常困難。我們以細胞總RNA提取為例,對各種酵母破壁方法進行比較。我們用不同的方法對酵母菌破壁,然后用Trizol試劑進行RNA的提取,zui后進行電泳檢測,發現不同破壁方法效果如下:
SPEX公司Freezer/Mill冷凍研磨儀將上述液氮研磨法進一步改良,使酵母破壁這樣的實驗更加簡單,無人值守即可完成。將樣品裝入密閉的研磨容器,浸入液氮,采用電磁振蕩技術,電磁往復驅動鋼制撞子,振蕩裝機樣品,動能慣性更大,實現高動能撞子大面積撞擊,快速粉碎研磨。過程中,樣品始終處于液氮溫度(-196°C)。
實驗方法:
*步:將樣品研磨罐預冷凍。
第二步:將酵母菌液加入液氮中,控制速度,使菌液進入液氮中后形成小顆粒。將菌體液氮顆粒轉入研磨罐中。放入冷凍研磨儀的樣品倉。
第三步:設置研磨程序,預冷10-15min,研磨2min,15個循環,兩次研磨之間間歇1min。
實驗結果:
經檢驗,用此法能使得90%以上的酵母細胞破壁。酵母的RNA和細胞內蛋白保持高活性。
相關產品
免責聲明
- 凡本網注明“來源:化工儀器網”的所有作品,均為浙江興旺寶明通網絡有限公司-化工儀器網合法擁有版權或有權使用的作品,未經本網授權不得轉載、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經本網授權使用作品的,應在授權范圍內使用,并注明“來源:化工儀器網”。違反上述聲明者,本網將追究其相關法律責任。
- 本網轉載并注明自其他來源(非化工儀器網)的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網贊同其觀點和對其真實性負責,不承擔此類作品侵權行為的直接責任及連帶責任。其他媒體、網站或個人從本網轉載時,必須保留本網注明的作品第一來源,并自負版權等法律責任。
- 如涉及作品內容、版權等問題,請在作品發表之日起一周內與本網聯系,否則視為放棄相關權利。