溴化乙錠用于觀察瓊脂糖和聚丙烯酰胺凝膠中的DNA,溴化乙錠是屬于高度靈敏的熒光染色劑,溴化乙錠用標準302nm 紫外光透射儀激發
并放射出橙紅色信號,觀察瓊脂糖凝膠中DNAzui常用的方法是利用熒光染料進行染色,含有一個可以嵌入DNA堆積堿基之間的
一個三環平面基團。它與DNA的結合幾乎沒有堿基序列特異性。在高離子強度的飽和溶液中,大約每2.5個堿基插入一個分子。當染料
分子插入后,其平面基團與螺旋的軸線垂直并通過范德華力與上下堿基相互作用。這個基團的固定位置及其與堿基的密切接近,導致與DNA結
合的染料呈現熒光,其熒光產率比游離溶液中染料有所增加。DNA吸收254nm處的紫外輻射并傳遞給染料,而被結合的染料本身吸收302nm和
366nm的光輻射。這兩種情況下,被吸收的能量在可見光譜紅橙區的590nm處重新發射出來。由于-DNA復合物的熒光產率比沒有結合
DNA的染料高出20-30倍,所以當凝膠中含有游離的(0.5ug/ml)時,可以檢測到少至10ng的NDA條帶。可以嵌入堿基分子中
,導致錯配。是強誘變劑,具有高致癌性!會在60-70度是蒸發,所以不要在膠太熱的時候加,或者應該加到液體里,0.5ug/ml,染色半小時,當加得過多時,也可以在室溫用水將已染色的凝膠浸泡20min以降低未結合的引起的背景熒光。由于具有一定的毒性,實驗結束后,應對含的溶液進行凈化處理再行棄置,以避免污染環境和危害人體健康。
1、對于含量大于0.5mg/ml的溶液,可作出如下處理:
a將EB溶液用水稀釋至濃度低于0.5mg/ml;
b加入一倍體積的0.5mol/L KMnO4,混勻,再加入等量的25mol/L HCl,混勻,置室溫數小時;
c加入一倍體積的2.5mol/L NaOH,混勻并廢棄。
2、EB含量小于0.5mg/ml的溶液可作如下處理:
a按1mg/ml的量加入活性炭,不時輕搖混勻,室溫放置1小時;
b用濾紙過濾并將活性碳與濾紙密封后丟掉。
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