人β-促脂素試劑盒

　人β-促脂素試劑盒客戶收到細胞先不開蓋，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后（看細胞密度而定）在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議受收細胞時的培養(yǎng)基拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細胞100X，200X各一張），排除細胞本身污染的情況；

　　收到細胞未開封，出現(xiàn)污染狀況我們負責免費發(fā)送一株細胞。

　　二、如為貼壁細胞，請在顯微鏡下觀察細胞密度：

　　1. 未超過80%匯合度時，用75%酒精（建議配置75%酒精的水也是滅菌超純水，噴灑整個瓶消毒后放到超菌臺內(nèi)，嚴格無菌操作；然后打開蓋子，先把培養(yǎng)基吸出10ml左右，放在離心管里，然后瓶口過火（嚴禁直接傾倒），這樣可以保證不污染，再用10ml的移液管，將剩余的培液全部吸出，放于離心管中，培養(yǎng)瓶中只剩余10ml左右培液就可以了。培養(yǎng)16hr(時間根據(jù)細胞生長情況調(diào)整）之后，傳代或者凍存。

　　2. 超過80%匯合度時，請按細胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。具體步驟如下：

　　1) 棄去培養(yǎng)液，用3ml PBS（不含鈣，鎂離子）洗1-2次；

　　2) 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于T25培養(yǎng)瓶中，倒轉放于37度培養(yǎng)箱1-3分鐘預熱，然后又將培養(yǎng)瓶倒轉大約30秒后，在倒置顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓分散，輕敲幾下培養(yǎng)培養(yǎng)瓶，細胞隨即脫落下來；

　　3) 加入6-8ml*培養(yǎng)基，吸出，分到新的培養(yǎng)瓶中，按要求分瓶。

　　三、如為懸浮細胞，吸出培養(yǎng)液，1000轉/分鐘離心5分鐘，吸出上清，管底細胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細胞后移回培養(yǎng)瓶。

　　注意：換液時一半用我們的培養(yǎng)基，一半用你們的，以免細胞不適應而造成生長不好。

　　四、細胞出現(xiàn)問題，可重發(fā)的情況有哪些？判定標準是什么？

　　（1）細胞運輸途中遭遇的各種問題，細胞丟失、破損、漏液等，重發(fā)；

　　（2）凍存的細胞復蘇后，絕大多數(shù)細胞未存活，重發(fā)；

　　（3）存活的細胞靜置24小時后，絕大多數(shù)細胞未存活，重發(fā)；

　　（4）凍存的細胞復蘇后或存活的細胞靜置4小時后并且未開封，出現(xiàn)污染，重發(fā)；

　　（5）視具體情況而定。　

　　Acris abcam cst Biorbyt santa Novus sigma lifespan NEB roche ABI R&D millipore BD Qiagen Cayman Jackson Life GeneTex Bio-Rad DSHB tocris peprotech 等品牌；部分產(chǎn)品現(xiàn)貨，超低比價，另常備 Trizol DMSO lipo2000 lipo3000 SC-2004 SC-2005常備現(xiàn)貨 ；貨期短，價格優(yōu)，售后齊全。

　　  細胞培養(yǎng)技術3個原則：1、用自己的一套試劑，不要和別人混用；2、勤觀察細胞，像養(yǎng)寵物一樣喜愛和關心；3、有規(guī)律地換液和傳代，不要“三天打魚，兩天曬網(wǎng)”。
　　質(zhì)量可靠，售后有保障

　　★我?guī)旒毎?000種，來源于美國ATCC,細胞都是經(jīng)過嚴格質(zhì)量控制。

　　凍存細胞時間為5-7個工作日，活細胞為7-15個工作日。

　　★由于細胞庫現(xiàn)有細胞類目多，為了不出現(xiàn)混亂錯誤，需要了解相關細胞價格及詳細資料請老師，對您造成的不便還請見諒！

一、細胞的復蘇：
非原代培養(yǎng)的細胞一般凍存于液氮之中，需要培養(yǎng)時要先從液氮中取出使之復蘇。細胞復蘇的原則——快速融化：必須將凍存在－196℃液氮中的細胞快速融化至37℃，使細胞外凍存時的冰晶迅速融化，避免冰晶緩慢融化時進入細胞形成再結晶，對細胞造成損害。
具體操作如下：
1、實驗前準備：
1.1、將水浴鍋預熱至37℃，并將含10%FBS的培養(yǎng)液置于其中預熱；
1.2、用75％酒精擦拭紫外線照射30min的超凈工作臺臺面。
1.3、在超凈工作臺中按次序擺放好消過毒的離心管、吸管、培養(yǎng)瓶等等。
2、取出凍存管及迅速解凍：
2.1、根據(jù)細胞凍存記錄按標簽找到所需細胞的編號。
2.2、從液氮罐中取出細胞盒，取出所需的細胞，同時核對管外的編號。
2.3、迅速將凍存管投入到已經(jīng)預熱的水浴鍋中迅速解凍，并要不斷的搖動，使管中的液體迅速融化，約1-2min后凍存管內(nèi)液體*溶解，取出用酒精棉球擦拭凍存管的外壁，再拿入超凈臺內(nèi)。
3、平衡離心 將細胞懸液吸到離心管中，1000～1500rpm離心3分鐘；
4、制備細胞懸液 吸去上清液，加入10 ml培養(yǎng)液，用吸管輕輕吹打均勻，使細胞懸浮；
5、細胞計數(shù) 細胞濃度以5×105/ml為宜。
6、培養(yǎng)細胞
將復合細胞計數(shù)要求的細胞懸液吸到培養(yǎng)瓶中，將培養(yǎng)瓶放入37℃和5％CO2的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)（略微擰松培養(yǎng)瓶蓋），換液的時間由細胞情況而定。通常，除少數(shù)特別注明對DMSO 敏感的細胞外， 絕大部分細胞株（包括懸浮性細胞）， 在解凍之后， 可直接放入含有10-15ml（5－10倍）新鮮培養(yǎng)基的培養(yǎng)角瓶中， 待隔天再置換新鮮培養(yǎng)基以去除DMSO 即可， 如此可避免大部分解凍后細胞無法生長或貼附的問題。