人P53試劑盒

　上海乾思生物公司人P53試劑盒細(xì)胞近3000種，來源于美國(guó)ATCC,細(xì)胞都是經(jīng)過嚴(yán)格質(zhì)量控制，在中國(guó)大陸努力搭建正牌細(xì)胞與國(guó)內(nèi)廣大科研人員之間的溝通橋梁。為您提供外，還有更多相關(guān)實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品，標(biāo)準(zhǔn)品，細(xì)胞株和實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)等等前期后續(xù)服務(wù)。選擇正確的實(shí)驗(yàn)試劑或材料是實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵。

　購(gòu)買上海乾思生物細(xì)胞注意事項(xiàng)（乾思生物）發(fā)布

　　一、客戶收到細(xì)胞先不開蓋，放在培養(yǎng)箱靜置若干小時(shí)后（看細(xì)胞密度而定）在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議受收細(xì)胞時(shí)的培養(yǎng)基拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，顯微鏡下拍細(xì)胞100X，200X各一張），排除細(xì)胞本身污染的情況；

　　收到細(xì)胞未開封，出現(xiàn)污染狀況我們負(fù)責(zé)免費(fèi)發(fā)送一株細(xì)胞。

　　二、如為貼壁細(xì)胞，請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞密度：

　　1. 未超過80%匯合度時(shí)，用75%酒精（建議配置75%酒精的水也是滅菌超純水，噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超菌臺(tái)內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作；然后打開蓋子，先把培養(yǎng)基吸出10ml左右，放在離心管里，然后瓶口過火（嚴(yán)禁直接傾倒），這樣可以保證不污染，再用10ml的移液管，將剩余的培液全部吸出，放于離心管中，培養(yǎng)瓶中只剩余10ml左右培液就可以了。培養(yǎng)16hr(時(shí)間根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)情況調(diào)整）之后，傳代或者凍存。

　　2. 超過80%匯合度時(shí)，請(qǐng)按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。具體步驟如下：

　　1) 棄去培養(yǎng)液，用3ml PBS（不含鈣，鎂離子）洗1-2次；

　　2) 加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于T25培養(yǎng)瓶中，倒轉(zhuǎn)放于37度培養(yǎng)箱1-3分鐘預(yù)熱，然后又將培養(yǎng)瓶倒轉(zhuǎn)大約30秒后，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓分散，輕敲幾下培養(yǎng)培養(yǎng)瓶，細(xì)胞隨即脫落下來；

　　3) 加入6-8ml*培養(yǎng)基，吸出，分到新的培養(yǎng)瓶中，按要求分瓶。

　　三、如為懸浮細(xì)胞，吸出培養(yǎng)液，1000轉(zhuǎn)/分鐘離心5分鐘，吸出上清，管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。

　　注意：換液時(shí)一半用我們的培養(yǎng)基，一半用你們的，以免細(xì)胞不適應(yīng)而造成生長(zhǎng)不好。

　　四、細(xì)胞出現(xiàn)問題，可重發(fā)的情況有哪些？判定標(biāo)準(zhǔn)是什么？

　　（1）細(xì)胞運(yùn)輸途中遭遇的各種問題，細(xì)胞丟失、破損、漏液等，重發(fā)；

　　（2）凍存的細(xì)胞復(fù)蘇后，絕大多數(shù)細(xì)胞未存活，重發(fā)；

　　（3）存活的細(xì)胞靜置24小時(shí)后，絕大多數(shù)細(xì)胞未存活，重發(fā)；

　　（4）凍存的細(xì)胞復(fù)蘇后或存活的細(xì)胞靜置4小時(shí)后并且未開封，出現(xiàn)污染，重發(fā)；

　　（5）視具體情況而定。　

　　Acris abcam cst Biorbyt santa Novus sigma lifespan NEB roche ABI R&D millipore BD Qiagen Cayman Jackson Life GeneTex Bio-Rad DSHB tocris peprotech 等品牌；部分產(chǎn)品現(xiàn)貨，超低比價(jià)，另常備 Trizol DMSO lipo2000 lipo3000 SC-2004 SC-2005常備現(xiàn)貨 ；貨期短，價(jià)格優(yōu)，售后齊全。

　　  細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)3個(gè)原則：1、用自己的一套試劑，不要和別人混用；2、勤觀察細(xì)胞，像養(yǎng)寵物一樣喜愛和關(guān)心；3、有規(guī)律地?fù)Q液和傳代，不要“三天打魚，兩天曬網(wǎng)”。
　　質(zhì)量可靠，售后有保障

　　★我?guī)旒?xì)胞近3000種，來源于美國(guó)ATCC,細(xì)胞都是經(jīng)過嚴(yán)格質(zhì)量控制。

　　凍存細(xì)胞時(shí)間為5-7個(gè)工作日，活細(xì)胞為7-15個(gè)工作日。

　　★由于細(xì)胞庫(kù)現(xiàn)有細(xì)胞類目多，為了不出現(xiàn)混亂錯(cuò)誤，需要了解相關(guān)細(xì)胞價(jià)格及詳細(xì)資料請(qǐng)老師，對(duì)您造成的不便還請(qǐng)見諒！

【細(xì)胞培養(yǎng)】
一、細(xì)胞的復(fù)蘇：
非原代培養(yǎng)的細(xì)胞一般凍存于液氮之中，需要培養(yǎng)時(shí)要先從液氮中取出使之復(fù)蘇。細(xì)胞復(fù)蘇的原則——快速融化：必須將凍存在－196℃液氮中的細(xì)胞快速融化至37℃，使細(xì)胞外凍存時(shí)的冰晶迅速融化，避免冰晶緩慢融化時(shí)進(jìn)入細(xì)胞形成再結(jié)晶，對(duì)細(xì)胞造成損害。
具體操作如下：
1、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：
1.1、將水浴鍋預(yù)熱至37℃，并將含10%FBS的培養(yǎng)液置于其中預(yù)熱；
1.2、用75％酒精擦拭紫外線照射30min的超凈工作臺(tái)臺(tái)面。
1.3、在超凈工作臺(tái)中按次序擺放好消過毒的離心管、吸管、培養(yǎng)瓶等等。
2、取出凍存管及迅速解凍：
2.1、根據(jù)細(xì)胞凍存記錄按標(biāo)簽找到所需細(xì)胞的編號(hào)。
2.2、從液氮罐中取出細(xì)胞盒，取出所需的細(xì)胞，同時(shí)核對(duì)管外的編號(hào)。
2.3、迅速將凍存管投入到已經(jīng)預(yù)熱的水浴鍋中迅速解凍，并要不斷的搖動(dòng)，使管中的液體迅速融化，約1-2min后凍存管內(nèi)液體*溶解，取出用酒精棉球擦拭凍存管的外壁，再拿入超凈臺(tái)內(nèi)。
3、平衡離心 將細(xì)胞懸液吸到離心管中，1000～1500rpm離心3分鐘；
4、制備細(xì)胞懸液 吸去上清液，加入10 ml培養(yǎng)液，用吸管輕輕吹打均勻，使細(xì)胞懸浮；
5、細(xì)胞計(jì)數(shù) 細(xì)胞濃度以5×105/ml為宜。
6、培養(yǎng)細(xì)胞
將復(fù)合細(xì)胞計(jì)數(shù)要求的細(xì)胞懸液吸到培養(yǎng)瓶中，將培養(yǎng)瓶放入37℃和5％CO2的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)（略微擰松培養(yǎng)瓶蓋），換液的時(shí)間由細(xì)胞情況而定。通常，除少數(shù)特別注明對(duì)DMSO 敏感的細(xì)胞外， 絕大部分細(xì)胞株（包括懸浮性細(xì)胞）， 在解凍之后， 可直接放入含有10-15ml（5－10倍）新鮮培養(yǎng)基的培養(yǎng)角瓶中， 待隔天再置換新鮮培養(yǎng)基以去除DMSO 即可， 如此可避免大部分解凍后細(xì)胞無法生長(zhǎng)或貼附的問題。