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供貨周期 | 一個月 | 應用領域 | 化工 |
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細胞株
細胞培養問答:細胞計數及存活測試
1、原理:
(1)計算細胞數目可用血球計數盤或是Coultercounter粒子計數器自動計數。
(2)血球計數盤一般有二個chambers,每個chamber中細刻9個1mm2大正方形,其中4個角落之正方形再細刻16個小格,深度均為0.1mm。當chamber上方蓋上蓋玻片后,每個大正方形之體積為1mm2×0.1mm=1.0x10-4ml。使用時,計數每個大正方形內之細胞數目,乘以稀釋倍數,再乘以104,即為每ml中之細胞數目。
(3)存活測試之步驟為dyeexclusion,利用染料會滲入死細胞中而呈色,而活細胞因細胞膜完整,染料無法滲入而不會呈色。一般使用藍色之trypan blue染料,如果細胞不易吸收trypan blue,則用紅色之Erythrosin bluish。計算細胞活率:活細胞數/(活細胞數+死細胞數)×。計數應在臺盼蘭染色后數分鐘內完成,隨時間延長,部分活細胞也開始攝取染料;因為臺盼蘭對蛋白質有很強的親和力,用不含血清的稀釋液,可以使染色計數更為準確。
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