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隨著對一些疾病逝行深入的研究后發(fā)現(xiàn)很多生理病理疾病的發(fā)生真實不僅僅跟蛋白本身的表達量相關(guān)，有些情況下蛋白的表達并沒有明顯的變化但是由于一些復雜的翻譯后修飾的改變從而影響了整個分子機制的改變。因此對樣本進行蛋白翻譯后修飾的研究就顯得尤為重要。蛋白修飾內(nèi)容主要包括磷酸化、乙酰化、泛素化、糖基化、甲基化等。

研究難點

拿磷酸化修飾組學為例

在眾多的PTM類型中，磷酸化修飾（Phosphorylation modification）的蛋白占到了所有蛋白質(zhì)約三分之一，是普遍的修飾類型之一。會影響到細胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導、細胞結(jié)構(gòu)、細胞增殖、凋亡、轉(zhuǎn)錄、代謝過程以及調(diào)控病原微生物的適應(yīng)能力等等，所以在不同細胞中，蛋白磷酸化水平會呈現(xiàn)不同的差異，特定位點的磷酸化程度可能從小于1%到大于90%。

由于磷酸化修飾組學基本都需要經(jīng)過一步富集過程，所以對于樣本量來說是一個挑戰(zhàn)，而在質(zhì)譜整個分析過程中必須兼顧分辨率，準確度，分析深度，靈敏度，重復性等多重難題。這往往導致在樣本珍貴情況下很難在低上樣量情況下得到高通量的數(shù)據(jù)，而隨著大隊列研究的背景下，巨量樣本的分析中，能否達到足夠分析數(shù)據(jù)的同時提升分析速度，這都是目前分析面臨的難題。

超越基因組藍圖

為了更好的面對挑戰(zhàn)，威斯康星大學Joshua J. Coon教授利用賽默飛新開發(fā)的Orbitrap Astral高分辨質(zhì)譜儀開發(fā)的DIA工作流程就非常好的解決了這個難題。

在2Th的窗口條件下，該流程利用了Astral分析器（非對稱無損質(zhì)量分析器）的200Hz快速二級掃描功能，可以在非常短梯度的達到之前很難達到的結(jié)果。Joshua J. Coon教授分別嘗試了7分鐘，15分鐘及30分鐘的Run to run上樣時間，在7分鐘的上樣時間就能輕松鑒定到超過23,000個磷酸化位點，而在30分鐘梯度更是提升到超過29,000個磷酸化位點。而RSD值同時可以控制在10.9%，在該進一步提升上樣量到250ng時，在30分鐘上樣時間內(nèi)（包含平衡，洗脫和上樣時間），可以鑒定到超過35,000磷酸化位點，達到新的鑒定深度，同時也非常好的體現(xiàn)了Orbitrap Astral高分辨質(zhì)譜在高靈敏度蛋白質(zhì)組學中的強大性能。而當做更多分級實驗，在240分鐘時間，更是達到驚人的接近90,000磷酸化位點數(shù)據(jù)。

精彩會議預告

集近年全球蛋白質(zhì)組學領(lǐng)域重大突破、前沿成果、最新的儀器設(shè)備展覽及分析技術(shù)的第十二屆中國蛋白質(zhì)組學大會將于 2023 年 9 月25 日-27 日在成都舉辦。

在本次會議上，作為賦能科技進步全球服務(wù)商的賽默飛攜全新一代高分辨質(zhì)譜儀 Orbitrap Astral 的用戶使用數(shù)據(jù)線下亮相,為市場所期待。我們趕快來一探究竟!

賽默飛專題午餐會

顛覆認知“質(zhì)”的飛躍

時間:9 月27 日     地點:蜀風廳 3

隨著 6 月 Obitrap Astral 高分辨質(zhì)譜儀驚艷面世和國內(nèi)外用戶的裝機與使用，第一波相關(guān)實測數(shù)據(jù)陸續(xù)發(fā)布，這些數(shù)據(jù)無一不在證明此款儀器在組學領(lǐng)域的劃時代地位。Orbitrap Astral 到底是如何實現(xiàn)集高通量、高靈敏度和深度覆蓋于一體為蛋白組學研究帶來革命性技術(shù)突破? 賽默飛將在本次午餐會詳細揭曉國內(nèi)外用戶實測一手數(shù)據(jù)。參與當天活動，更有機會把 Orbitrap Astral 同款積木帶回家!