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在線脫鹽高通量液質(zhì)聯(lián)用分析寡核苷酸

閱讀:352      發(fā)布時(shí)間:2020-06-19
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    寡核苷酸是一類短鏈核苷酸的總稱(包括脫氧核糖核酸及核糖核酸),如用于基因擴(kuò)增和基因診斷的PCR引物和反義核酸,介導(dǎo)基因沉默的小干擾RNA ( small interfering RNA,siRNA) 等,努力研究開發(fā)基因靶向治療藥物用于治療病毒、腫瘤和遺傳疾病。天然的寡核苷酸在體內(nèi)容易降解,穩(wěn)定性差。通過修飾的寡核苷酸具有較好的藥學(xué)特性和體內(nèi)穩(wěn)定性12,但合成的寡核苷酸產(chǎn)物含有各種雜質(zhì),需純化精制,產(chǎn)物的鑒定和產(chǎn)品的質(zhì)量控制至關(guān)重要。液相和液質(zhì)聯(lián)用于寡核苷酸目標(biāo)產(chǎn)物的高分辨分離和鑒定,可以判斷待測(cè)寡核苷酸結(jié)構(gòu)的變化,比如脫嘌呤、氧化、磷酸化等。寡核苷酸樣品中存在的鹽分會(huì)影響其離子化過程和造成峰強(qiáng)度降低,因此有必要進(jìn)行質(zhì)譜鑒定前的除鹽處理。常規(guī)離線除鹽方法耗時(shí);可以利用在線除鹽方式進(jìn)行寡核苷酸的分離鑒定,但樣品通量需要提高,以滿足高通量的要求,如平均每天2000個(gè)樣品的需求等。

    本工作中,我們利用閥切換技術(shù)對(duì)寡核苷酸樣品進(jìn)行在線除鹽,建立簡(jiǎn)單、快速、高效的超高效液相色譜線性離子阱質(zhì)譜儀( Vanquish Duo-LTQ XL )在線除鹽和寡核苷酸分子量
測(cè)定的分析方法。
 

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