傳統的分離線粒體的方法耗時費力, 并且需要進行Dounce勻漿,所以每次只能處理一種樣品。ThermoScientific線粒體分離試劑盒使用的是基于試劑的非機械分離方法,不需要特殊儀器,因此可以同時處理多種樣品(六種)。利用配方的試劑對培養的哺乳動物細胞沉淀進行溫和的裂解可以得到量的線粒體,且將對線粒體完整性的傷害降至最小。該產品的說明書介紹了純度/收率比的優化指南。該試劑盒也提供了配合使用杜恩斯勻漿的方法,使用該方法可以得到比單使用試劑的方法高兩倍的線粒體回收率。兩種方法通過差速離心分離線粒體和胞漿成分,使用臺式微量離心機可以在大約40分鐘以內完成實驗(收獲細胞之后)。分離的線粒體可以用于細胞凋亡、信號轉導、代謝研究以及線粒體蛋白質組研究等后續實驗。
產品特點:
- 快速 – 從2 x 107個細胞中分離完整的線粒體僅需40分鐘(收獲細胞之后)。
- 靈活 – 使用基于試劑的方法可以同時處理多個樣品,配合使用Dounce勻漿的方法可獲得量的線粒體。
- 可優化 – 說明書中提供了純度/收率比的優化指南。
- 簡單 – 僅需臺式微量離心機和微量離心管即可。
- 相容性強 – 分離的線粒體可以用去垢劑進行裂解,并且與所有的后繼實驗兼容,包括2D電泳。
線粒體完整性分析。分別使用基于試劑的方法(A和B)和Dounce勻漿法(C和D)從C6細胞中制備線粒體和胞漿組分。利用蛋白質免疫印跡分析各組份中 (A和C)以及電壓依賴性離子通道(VDAC) (B和D)。使用的底物為用于蛋白免疫印跡的SuperSignal皮克級化學發光底物(產品貨號 34080)。M = 線粒體,C=胞漿
分析線粒體組份中的胞漿蛋白污染。從NIH 3T3細胞制備線粒體和胞漿蛋白組分。利用蛋白質免疫印跡分析各組份中的胞漿蛋白hsp90。M = 線粒體,C =胞漿。
降低線粒體組份中溶酶體和過氧化物酶體污染。利用基于試劑的改良分離方法制備了線粒體組份和胞漿組分。3,000 xg 離心收集較重的更純的線粒體,12,000xg離心收集上清中的線粒體。利用蛋白質免疫印跡分析每個組份中A. 過氧化物酶體膜蛋白70 (PMP70, C6細胞)和B.溶酶體組織蛋白酶S (NIH3T3細胞)。M1 = 3,000 xg 線粒體組份,M2 = 12,000 xg 線粒體組份,C =胞漿。
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