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豬叉頭框蛋白C1(FOXC1) ELISA 試劑盒
本試劑盒基于檢測樣本的特異性抗體包被酶標板,加入待測樣本,樣本與包被在酶標板上的特異性抗體結合,形成免疫復合物。清洗后加入酶標二抗,與免疫復合物結合,形成完整的三明治復合物。再加入底物溶液,底物在酶的作用下變色,顏色的深淺與樣本的濃度呈正相關。后加入終止液,使反應停止,在450nm波長下測量各孔的光密度值(OD值),通過標準曲線計算樣本的濃度。
豬叉頭框蛋白C1(FOXC1) ELISA 試劑盒
樣品收集、處理及保存方法
1. 血清:使用不含熱原和內毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000 轉離心 10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉離心 30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液:3000 轉離心 10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉離心 10 分鐘取上清。
5. 保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解 凍并確保樣品均勻地充分解凍。
試劑盒組成
試劑盒組成 | 48孔配置 | 96孔配置 | 保存 |
說明書 | 1份 | 1份 | |
封板膜 | 2片(48) | 2片(96) | |
密封袋 | 1個 | 1個 | |
酶標包被板 | 1×48 | 1×96 | 2-8℃保存 |
標準品:36U/L | 0.5ml×1瓶 | 0.5ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
標準品稀釋液 | 1.5ml×1瓶 | 1.5ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
酶標試劑 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
樣品稀釋液 | 3 ml×1瓶 | 6 ml×1瓶 | 2-8℃保存 |
試劑盒組成 | 48孔配置 | 96孔配置 | 保存 |
說明書 | 1份 | 1份 | |
封板膜 | 2片(48) | 2片(96) |
實驗步驟
1. 準備試劑盒:將試劑盒從冰箱中取出,室溫放置30分鐘以上,使試劑盒恢復至室溫。
2. 加樣:分別向各孔中加入標準品、待測樣本和空白孔,每孔加入50μl。
3. 孵育:用封板膠紙封住反應孔,輕輕振蕩混勻,37℃孵育1小時。
4. 洗滌:甩去孔內液體,用洗滌液充分洗滌4-5次,每次30秒。
5. 加酶標二抗:每孔加入50μl酶標二抗溶液,輕輕振蕩混勻,37℃孵育30分鐘。
6. 洗滌:甩去孔內液體,用洗滌液充分洗滌4-5次,每次30秒。
7. 加底物:每孔加入50μl底物溶液,輕輕振蕩混勻,37℃孵育15-20分鐘。
8. 終止反應:每孔加入50μl終止液,輕輕振蕩混勻。
9. 讀數:用酶標儀在450nm波長處讀取各孔的光密度值。
注意事項
在進行ELISA檢測時,需要注意以下幾點:
1. 保證試劑盒的質量:選擇質量可靠、經過認證的試劑盒,避免使用過期或質量不穩定的試劑。
2. 標準化操作:按照試劑盒說明書進行標準化操作,避免操作過程中的人為誤差。
3. 避免交叉污染:在實驗過程中,要特別注意防止樣品和試劑之間的交叉污染,以免影響檢測結果的準確性。
4. 溫度控制:ELISA檢測需要在恒溫條件下進行,因此要確保實驗過程中溫度的穩定和準確性。
5. 空白吸光度值:在實驗過程中,要特別注意空白吸光度值的穩定性,避免其對檢測結果的影響。
6. 實驗數據的處理:對實驗數據進行正確的處理和分析,包括對異常值的處理、數據轉換等,以確保結果的準確性和可靠性。
7. 質量控制:在實驗過程中,應進行必要的質量控制,如定期進行室內質控和室間質評等,以確保實驗室檢測結果的準確性。
試劑盒性能:
1. 檢測范圍:1.95 nmol/L –100 nmol/L。
2. 靈敏度:檢測濃度小于0.78 nmol/L。
3. 特異性:不與其它可溶性結構類似物交叉反應。
4. 重復性:板內變異系數小于10% ,板間變異系數小于15% 。
ELISA90分鐘一步法的優點
ELISA90分鐘一步法的優點主要包括:
1.操作簡單:該方法只需要一步操作即可完成,操作過程簡單明了,易于掌握。
2.快速:ELISA90分鐘一步法可以在短時間內完成,適合于大批量樣品的快速檢測。
3.特異性高:該方法采用特定的抗體或抗原進行固定和檢測,因此具有較高的特異性。
4.靈敏度高:ELISA90分鐘一步法具有較高的靈敏度,可以檢測出較低濃度的抗原或抗體。
5.重復性好:該方法的重復性較好,結果較為穩定。
6.安全性高:ELISA90分鐘一步法不使用放射性同位素等有害物質,因此具有較高的安全性。
需要注意的是,ELISA90分鐘一步法也存在一些缺點,例如可能會受到非特異性干擾因素的影響,導致結果不準確。此外,該方法的試劑成本較高,不適合于小規模樣品的檢測。
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