葡萄糖含量檢測試劑盒說明書

注意：正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定。

貨號： YX-W-B601

規(guī)格： 100T/96S

產(chǎn)品內(nèi)容：

試劑一：葡萄糖 9mg×1支，4℃保存；臨用前加入1ml蒸餾水充分溶解為50μmol/mL 葡萄糖溶液， 用蒸餾水稀釋為 0.5μmol/mL 葡萄糖溶液-20℃ 保存；

試劑二：液體 10mL×1 瓶，4℃保存； 試劑三：液體 10mL×1 瓶，4℃保存；

產(chǎn)品說明：

葡萄糖不僅是細胞能量代謝的主要底物，而且其代謝中間產(chǎn)物是生物合成的重要底物。植物可通過光合作用產(chǎn)生葡萄糖。就哺乳動物而言，葡萄糖不僅是大腦神經(jīng)系統(tǒng)、肌肉、脂肪組織等的能源，而且與還原性輔酶、乳糖和乳脂的合成密切相關(guān)。

葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸，并產(chǎn)生過氧化氫；過氧化物酶催化過氧化氫氧化 4-

氨基偶聯(lián)酚，生成有色化合物，在 505 nm 有特征吸收峰。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研缽和蒸餾水。

操作步驟：

一、 葡萄糖提取：

組織的處理：按照組織質(zhì)量（g）：蒸餾水體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織， 加入 1mL 蒸餾水），研磨成勻漿，95℃水浴 10 分鐘（蓋緊，防止水分散失），冷卻后，8000g， 25℃離心 10min，取上清液備用。

細菌或細胞處理：收集細菌或細胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細菌或細胞數(shù)量（104 個）： 蒸餾水體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 蒸餾水），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3S，間隔 10S，重復 30 次），95℃水浴 10 分鐘（蓋緊，防止水分散失），冷卻后，8000g，25℃離心 10min，取上清液備用。

二、 測定步驟：

1、 分光光度計/酶標儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 505nm，蒸餾水調(diào)零。

2、 混合試劑的配制：使用前將試劑二和試劑三 1:1 等體積混合，用多少配多少。

3、 加樣表（在EP 管/96 孔板中加入下列試劑）：

混勻，置37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴中，保溫15min，于505nm 波長處讀取

吸光度。空白管、標準管和測定管吸光值分別記為A1、A2 和A3。空白管和標準管只要做一管。三、 葡萄糖含量計算：

1、按樣本蛋白濃度計算

葡萄糖含量(μmol/mg prot)=(C  標準×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(V1×Cpr)

=0.5×(A3-A1)÷(A2-A1)÷Cpr。

2、按樣本鮮重計算

葡萄糖含量（μmol/g 鮮重）= (C 標準×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2)

=0.5×(A3-A1)÷(A2-A1)÷W

3、按細菌或細胞密度計算

葡萄糖含量（μmol/ 104 cell)= (C 標準×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(500×V1÷V2)

=0.001×(A3-A1)÷(A2-A1)

C 標準：標準管濃度，0.5μmol/mL；V1：加入樣本體積，0.1mL；V2：加入提取液體積，1mL；

Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g；500：細菌或細胞總數(shù)，500萬。注意：檢測限為50nmol/g 鮮重或0.5nmol/mg prot

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