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熒光顯微鏡是利用激光、超高壓汞燈或氙燈作為光源來觀察物體中熒光物質熒光的裝置。普通光學顯微鏡使用鹵素燈發出的可見光作為光源來照亮物體并觀察反射光和透射光。
熒光顯微鏡是顯微鏡的一種,其主要觀察對象是用發出熒光的物質標記的生物組織和細胞。顯微鏡的分辨率取決于所用光的波長,因此使用短波長光的熒光顯微鏡具有空間和時間分辨率。
因此,可以獲得高度定量的信息。熒光顯微鏡變得越來越復雜,例如共焦激光顯微鏡和多光子顯微鏡,并且變得越來越重要。
熒光顯微鏡的應用
熒光顯微鏡主要用于生物成像。具體目標是細胞和組織,也可以在它們活著的時候進行觀察。為了用熒光標記目標,需要結合使用多種技術,包括:
通過基因重組等對特定蛋白質進行熒光標記的技術。
使用熒光標記化學品標記核酸等的技術
在特定細胞中表達熒光蛋白的技術
這些技術使我們能夠觀察目標蛋白和表達基因的定位。此外,還開發了針對特定物質發出熒光的藥物和蛋白質,使得神經活動和細胞內物質動態的可視化成為可能。
近年來,CRISPR技術的出現使得創建轉基因生物變得更加容易,并且其應用范圍正在迅速擴大。
熒光顯微鏡原理
熒光顯微鏡是觀察熒光的裝置。當熒光物質吸收特定的光作為能量(激發光)并再次釋放能量時,就會發出熒光。
激發光照射后立即發光。熒光的波長比激發光的波長長,并且這些波長根據熒光團而變化。熒光顯微鏡具有由以下部件組成的濾光器單元,用于觀察特定的熒光。
傳輸來自光源的激發光的濾光片
允許發射的熒光通過的濾光片
防止激發光干擾熒光的鏡子
通過更換或組合濾光片單元,可以從同一樣本中觀察到多種熒光物質。