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血漿二次復凍還能用嗎?
【標本收集注意事項】
1.收集血液的試管應為一次性的無熱原,無內毒素試管。
2.血清和血漿避免使用溶血,高血脂標本。
3.標本應清澈透明,懸浮物應離心去除。
4.標本收集后若不及時檢測,需按一次使用量分裝,凍存于-20℃,-80℃電冰箱內,避免反復凍融。
5.可根據標本的實際情況,做適當倍數稀釋(建議做預實驗,以確定稀釋倍數) 。
6.收集標本,盡量做到雙份的用量,避免一次實驗失敗,重復實驗時標本缺失,從而耽誤實驗進程。
7.收集標本時,應該做好防護措施(比如戴手套,口罩,護目鏡等),認為所有標本都具有一定的潛在危險性。
8.樣本處理應該在生物安全柜里面,并且正確使用生物安全柜。
樣本正確的處理方法應該是這樣的:
【標本處理辦法】
1.血清:將采集的全血靜置冰箱4℃過夜,然后1000-3000rpm離心10分鐘,取上清立即測試,暫時不測可以放入-20℃(1-3個月)或-80℃(3-6個月)保存。
2.血漿:用EDTA,枸櫞酸鈉,肝素等作為抗凝劑,加入血液混勻后,1000-3000rpm離
心10分鐘,取上清立即測試,暫時不測可以放入-20℃(1-3個月)或-80℃(3-6個月)
保存。
3.組織勻漿:切取組織塊,0.01MPBS中過洗一次;按照1G組織加入5-10ml組織蛋白萃取試劑的比例,在冰水中勻漿。勻漿完成后,5000-10000rpm離心10分鐘,取上清立即測試,暫時不測可以放入-20℃(1-3個月)或-80℃(3-6個月)保存。
4.細胞培養上清:1000-3000rpm離心10分鐘,取上清立即測試,暫時不測可以放入-20℃(1-3個月)或-80℃(3-6個月)保存。
5.尿液,腹水,腦脊液等:1000-3000rpm離心10分鐘,取上清立即測試,暫時不測可以放入-20℃(1-3個月)或-80℃3-6個月)保存。
注:樣品稀釋的一般原則
上海繼譜的廣大客戶群體及其他用戶須查閱相關文獻了解標本內待測因子的含量,決定適當的稀釋倍數,以使稀釋后樣品中待測因子的濃度處于ELISA試劑盒的zuijia檢測范圍。樣品的稀釋應有詳細記錄。新鮮冰凍血漿(FFP)融化后在一定時間內再次冰凍,血漿中各種成分的變化。方法將FFP37℃水浴融化后,測定血漿中各類凝血因子的活性、白蛋白(Alb)總蛋白(TP)含量和膽堿酯酶(CHE)活性;在12h內將其冰凍,在7天后再次融化,測定Alb、TP、CHE和各種凝血因子的活性。結果FFP再次冷凍后,除活化部分凝血酶時間(APTT)顯著變化外(P0.05),其余凝血酶原時間(PT)、凝血酶時間(TT)、纖維蛋白原(Fbg)等凝血指標均無明顯改變(P0.05),CHE和Alb、TP也無明顯改變(P0.05)。結論FFP融化后,如果12h內未輸用,可以將其立即冰凍,給PT、Fbg、TT等。