Cy3 maleimide，CY3-馬來酰亞胺

Cy3 (Cyanine 3) 是一種發(fā)橘黃色熒光的花青素?zé)晒馊玖稀Ｋ臒晒夂芰粒⑶覍?duì)pH不敏感，一般可以用530nm-561nm的激光束激發(fā)然后用 TRITC (tetramethylrhodamine) 的濾片觀察，所以在絕大部分熒光儀器上都可以使用。標(biāo)記后，Cy3的背景熒光一般認(rèn)為比TAMRA等TRITC系列的染料低。 Cy3可以用來標(biāo)記蛋白，抗體，多肽，核酸分子，納米粒等。

馬來酰亞胺(maleimide)是生物標(biāo)記反應(yīng)中常用的基團(tuán)，它可以和巰基(-SH)通過親和加成反應(yīng)生成穩(wěn)定的巰醚(thioester)結(jié)構(gòu)從而實(shí)現(xiàn)標(biāo)記。盡管胺基(比如賴氨酸精氨酸側(cè)鏈)也有親和性，但在中性或微酸性緩沖液中，馬來酰亞胺選擇性標(biāo)記巰基(反應(yīng)速度比胺基快>1000倍)。標(biāo)記反應(yīng)反應(yīng)迅速，選擇性高，產(chǎn)率好，另外，巰基是一種在生物分子中廣泛存在的官能團(tuán)，比如蛋白中的半胱氨酸(cysteine)和雙硫鍵等，因此馬來酰亞胺/巰基(maleimide/thiol)標(biāo)記已成為僅次于NHS/胺基標(biāo)記的常用生物連接反應(yīng)(bioconjugation)。

Cy3-馬來酰亞胺的水溶性較低，所以在水相的標(biāo)記反應(yīng)體系內(nèi)需要使用有機(jī)共溶劑，常用有機(jī)溶劑包括DMF，DMSO和乙腈等。如需標(biāo)記的分子對(duì)有機(jī)溶劑敏感，可選擇磺化花青素（sulfonated cyanine），即磺化Cy3-馬來酰亞胺。兩者的光譜性質(zhì)幾乎一致，因此大部分應(yīng)用可相互替換。兩者的主要區(qū)別在于：磺化染料是水溶性的，在水相的標(biāo)記反應(yīng)體系內(nèi)不需要使用有機(jī)共溶劑，并且降低染料在水中聚集的可能性，增強(qiáng)標(biāo)記效率。

Cy3-馬來酰亞胺標(biāo)記后的產(chǎn)物Ex/Em是554/566nm。和它具有相似熒光特性的染料包括TAMRA，Alexa Fluor 555，DyLight 550，BODIPY® TMR-X等。

注意事項(xiàng)

Cy3-馬來酰亞胺水溶性較低，標(biāo)記反應(yīng)可在純有機(jī)溶劑中進(jìn)行或者含有機(jī)助溶劑的水相中進(jìn)行。

天然生物分子中巰基一般于氧化狀態(tài)(如雙硫鍵)存在，在馬來酰亞胺標(biāo)記前，務(wù)還原劑(如DTT，TCEP)活化巰基并除去多余還原劑。

馬來酰亞胺也可以和疊氮化合物反應(yīng)，應(yīng)避免疊氮官能團(tuán)。

標(biāo)記反應(yīng)不要放在強(qiáng)光下，因?yàn)榇蟛糠譄晒饣衔镌趶?qiáng)光下長(zhǎng)時(shí)間照射會(huì)緩慢光漂泊(photobleaching)。

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