Cell Counting Kit-8是一種廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性檢測的試劑盒。其核心成分是水溶性四唑鹽,在細胞存活狀態下,可以被細胞內的脫氫酶還原為橙黃色的水溶性甲臜產物。通過測定甲臜產物的吸光度,可以間接反映細胞的存活情況和增殖能力。
一、工作原理
Cell Counting Kit-8的工作原理基于顏色變化。WST-8是一種類似于MTT(四唑鹽)的水溶性化合物,但其毒性更低,更適合用于細胞活性檢測。在細胞存活狀態下,細胞內的脫氫酶可以將WST-8還原為橙黃色的甲臜產物(Formazan)。甲臜產物的生成量與活細胞的數量成正比,因此可以通過測定甲臜產物的吸光度來評估細胞的存活情況和增殖能力。
具體步驟如下:
細胞接種
將待測細胞接種到96孔板中,每孔加入一定數量的細胞。
加入Cell Counting Kit-8試劑
在細胞培養一定時間后,向每孔中加入適量的試劑。可以直接加入到細胞培養基中,無需去除原有的培養基。
測量吸光度
使用酶標儀測定每孔中甲臜產物的吸光度。吸光度的大小與活細胞的數量成正比,從而可以計算出細胞的存活率和增殖能力。
二、應用領域
細胞增殖檢測
廣泛用于檢測細胞的增殖能力,適用于各種類型的細胞,包括腫瘤細胞、原代細胞和干細胞等。
細胞毒性檢測
可以用于評估藥物、化學物質和其他因素對細胞的毒性作用。通過比較處理組和對照組的吸光度,可以計算出細胞的存活率和毒性指數。
藥物篩選
在高通量藥物篩選中具有重要應用,可以快速評估大量化合物對細胞的影響,幫助研究人員篩選出具有潛在治療價值的候選藥物。
疾病研究
可用于研究疾病的發生機制和進展,例如腫瘤的生長和轉移、神經退行性疾病等。
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