靈敏 ECL 化學發光試劑盒
MCE 國際站：Sensitive ECL Kit
品牌：MedChemExpress (MCE)
存儲條件：4°C，1 年避光保存
簡介：靈敏 ECL 化學發光試劑盒可用于檢測辣根過氧化物酶 (HRP) 標記的抗體及其關聯的抗原。
概述：MCE 靈敏 ECL 化學發光試劑盒用于檢測辣根過氧化物酶 (HRP) 標記的抗體及其關聯的抗原。HRP 標記的抗體直接或間接結合膜上的目的蛋白，在洗膜后加入本試劑盒配制的 ECL 工作液，即可由 HRP 催化產生化學發光，結果可通過 X 光膠片壓片或 CCD 成像系統進行檢測。本產品配方，靈敏度高，對抗原的低檢測限度可達低皮克級別，1-2 小時內檢測信號仍保持穩定。本產品配方經過優化，適用于極低濃度的抗體檢測，在WB 實驗中，一抗 (1 mg/mL) 儲存液可稀釋 1:1,000-1:4,000 倍 (終濃度約 0.25-1 μg/mL)，二抗 (1 mg/mL) 儲存液可稀釋 1:5,000-1:10,000 倍 (終濃度約0.1-0.2 μg/mL)。持久的發光信號，高的信噪比，保證了最佳的檢測效果。
描述：
MCE Sensitive ECL Kit 通過在 HRP 和過氧化物存在下氧化魯米諾，實現低皮克級抗原檢測。該反應產生長時間的化學發光，可在 X 射線膠片或數字成像系統上可視化。
該試劑盒產生強而持久的信號（6-8 小時），結合非常低的背景水平，可實現長時間曝光并檢測低豐度蛋白質。在 Western Blot 實驗中，一抗（1 mg/mL）的儲存液可以按 1:1,000-1:4,000 的比例稀釋（最終濃度約為 0.25-1 μg/mL）。二抗（1 mg/mL）的儲存液可以按 1:5,000-1:10,000 的比例稀釋（最終濃度約為 0.1-0.2 μg/mL）。
操作說明：1. 進行常規 WB 操作：電泳、轉膜、封閉、HRP 標記抗體孵育、洗膜。一抗 (0.25-1 μg/mL) 室溫孵育 1 h 或 4°C 過夜，洗膜后，二抗 (0.1-0.2 μg/mL) 室溫孵育30-60 min。2. 配制 ECL 工作液：在使用前等量混合適量 A 液和 B 液，混合后盡快使用。3. Western 二抗孵育后，進行數次洗滌，用平頭鑷子將印跡膜取出，瀝干膜上的洗膜液，將結合有蛋白的一面朝上，放置于潔凈保鮮膜上。4. 根據印跡膜的大小，按 0.125 mL 工作液/cm2 膜的比例滴加 ECL 工作液到膜上，確保工作液均勻覆蓋在整張膜上，室溫孵育 3-5 min。5. 棄去印跡膜上的 ECL 工作液，用吸水紙吸去過多的液體。將印跡膜放在兩片保鮮膜中間，隨后進行壓片檢測或成像儀檢測。6. 壓片檢測：將印跡膜固定于片夾內。暗室內壓片 1 min，立即顯影定影，根據結果再調整壓片時間。或直接壓片 0.5、1、3、5 min，然后一起顯影定影觀察結果。7. 成像儀檢測：將印跡膜放置到成像儀內，參考儀器說明書進行檢測。
注意事項：1. 為獲得最佳實驗結果，請務必優化實驗條件，包括：樣品量、凝膠類型、轉膜方法、膜類型、封閉試劑、洗滌緩沖液、一抗和二抗濃度以及孵育時間等。2. 實驗過程中請確保膜不會變干。3. 為獲得最佳實驗結果，請在孵育步驟中使用搖床。4. A 液和 B 液在吸取過程中必須更換槍頭，A 液和 B 液相互污染后會導致 A 液或 B 液逐漸失效，影響后續的使用效果。5. 實驗室常見照明不會損害 ECL 工作液，但曝露于日光或強光下時間過久會降低試劑靈敏度，移至暗室操作即可。6. 疊氮鈉 (NaN3) 會抑制 HRP 活性，應避免在緩沖液中使用 NaN3，如必須使用，勿超過 0.01%。7. 接觸膜時請佩戴手套且使用干凈鑷子等潔凈器材，避免蛋白污染及高背景。8. 本產品僅限于專業人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品。9. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
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