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孔雀石綠,分子式為C23H25ClN2,是人工合成的有機化合物,是一種有毒的三苯甲烷類化學物,既是染料,也是殺真菌、殺細菌、殺寄生蟲的藥物,長期超量使用可致癌,無公害水產(chǎn)養(yǎng)殖領(lǐng)域國家明令禁止添加。 2019年12月27日,孔雀石綠被列入食品動物中禁止使用的藥品及其他化合物清單。
孔雀石綠進入水生動物體內(nèi)后,會快速代謝成脂溶性的無色孔雀石綠??兹甘G具有潛在的致癌、致畸、致突變的作用,其在養(yǎng)殖業(yè)中的使用未得到美國食品與藥物管理局(FDA )的認可;根據(jù)歐盟法案2002/675/EC的規(guī)定,動物源性食品中孔雀石綠和無色孔雀石綠殘留總量限制為2μg/kg;日本的肯定列表也明確規(guī)定在進口水產(chǎn)品中不得檢出孔雀石綠殘留;我國在農(nóng)業(yè)行業(yè)標準《NY5071- 2002無公害食品魚藥使用準則》中也將孔雀石綠列為禁用藥物。由于沒有低廉有效的替代品,孔雀石綠在水產(chǎn)養(yǎng)殖中的使用屢禁不止。
深圳艾瑞斯生產(chǎn)的孔雀石綠膠體金快速檢測卡應用競爭抑制膠體金免疫層析的原理制成,用于檢測水產(chǎn)品組織樣本中孔雀石綠殘留。樣本溶液滴入檢測卡的加樣孔后,樣本溶液中的孔雀石綠與金標抗體相結(jié)合,從而阻止金標抗體與纖維素膜上孔雀石綠偶聯(lián)物結(jié)合。當樣本溶液中的孔雀石綠含量大于檢測限時,檢測線T不顯色或顯色明顯比C線淺,結(jié)果為陽性;當樣本溶液中孔雀石綠含量小于檢測限時檢測線T顯紫紅色(T線與C線一致或更深),結(jié)果為陰性。
樣本前處理:
1、取切碎的一定量的去脂肪水產(chǎn)品組織樣品,用均質(zhì)機均質(zhì);
2、取約4 g 均質(zhì)物于50 mL 離心管中;
3、依次加入0.5 mL提取劑1和1 mL提取劑2,再加入4 mL乙腈,擰緊管蓋劇烈振蕩混勻2分鐘;
4、室溫下(20-25℃) 4000 轉(zhuǎn)/分鐘離心5 分鐘;
5、吸取1 mL 上清液于10 mL離心管中,加入100 μl氧化劑,60℃下氮氣或空氣吹干,得固體殘渣;
6、向吹干的離心管中加入0.3 mL MG復溶液,用吸管反復吸打管內(nèi)液體以沖洗及溶解管壁上的待測物質(zhì),作為待檢樣品溶液。
樣品檢測:
1、撕開鋁箔袋,取出檢測卡,水平放置桌面上;
2、用滴管吸取待檢樣品溶液,垂直滴加4滴(約120 μL)到金標微孔中,再用滴管將微孔中的紅色物質(zhì)和待檢溶液充分混勻,靜置2 min,吸取全部液體滴加到檢測卡的加樣孔中(S處);
3、加樣后開始計時,室溫下放置8-10分鐘判斷結(jié)果,超過10分鐘的結(jié)果只能作為參考。
結(jié)果判斷:
陰性:對照線(C)出現(xiàn)紫紅色線,檢測線(T)顯色比C線深或者一樣深,說明樣品中待檢物質(zhì)濃度低于檢測限或無待檢物殘留。
陽性:對照線(C)出現(xiàn)紫紅色線,檢測線(T)不顯色或T線顯色明顯比C線淺,說明樣品中待測物濃度高于檢測限。T線明顯顯示為綠色的,可判為陽性。
失效:在檢測窗內(nèi),對照線(C)不出現(xiàn)紫紅色線。
注意事項:
1 、過期或鋁箔袋破損的產(chǎn)品,均不可使用。
2 、檢測卡從冰箱中取出時應恢復到室溫后打開,打開的檢測卡應盡快使用以免受潮后失效。
3 、不要觸摸檢測卡中央的白色膜面。
4 、取液滴管不可混用,以免交叉污染。
5 、待檢樣品溶液需清亮、無混濁顆粒、無細菌污染,否則容易導致阻塞、顯色不明顯等異?,F(xiàn)象,從而影響實驗結(jié)果的判定。