在使用人半乳糖凝集素9(Galectin-9)ELISA檢測試劑盒進行實驗時,以下是一些重要的注意事項:
試劑盒組成與保存:試劑盒通常包含預包被抗體的酶標板、酶標抗體工作液、標本稀釋液、濃縮洗滌液、標準品、底物工作液、第一抗體工作液和終止液等。這些組分通常需要在2-8℃的溫度下保存123。
樣本收集與處理:收集血清、血漿(如EDTA、肝素抗凝)、細胞培養上清液、組織勻漿等樣本,并盡早檢測。若不能立即檢測,應在2-8℃保存48小時,更長時間則需冷凍(-20℃或-70℃)保存,避免反復凍融。血清或血漿樣本在測定前應至少進行1:50稀釋1。
實驗操作:實驗采用雙抗體夾心法。簡而言之,將樣本和生物素標記抗體加入酶標板孔中進行反應,隨后進行洗滌,加入過氧化物酶標記的親和素反應,最后用底物TMB顯色,通過測量OD值來確定Galectin-9的濃度2。
檢測范圍與靈敏度:不同的試劑盒可能有不同的檢測范圍和靈敏度。例如,一些試劑盒的檢測范圍是78.12-5000pg/mL,靈敏度為28.55pg/mL3。
實驗器材:需要使用標準規格的酶標儀、自動洗板機、恒溫箱、系列可調節移液器及吸頭等實驗器材2。
注意事項:實驗操作條件的差異(如操作者、移液技術、洗板技術等)可能導致標準曲線的OD值有所差異。因此,實驗者需根據自身實驗條件建立標準曲線3。
請務必遵循具體試劑盒的使用說明書,并嚴格按照實驗步驟操作,以確保實驗結果的準確性和可靠性。
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