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CNBr純化磁珠產品介紹:
CNBr純化磁珠在制備和使用定制親和層析介質方面具有良好的記錄。 將生物特異性配體與 CNBr 活化的瓊脂糖偶聯是一種廣泛使用、成功且有據可查的技術。 偶聯反應是自發的、快速的并且易于進行。 不需要有毒化學品或特殊設備。
這種預激活的 SepFast 珠子可以很容易地用于制造各種親和層析介質,適用于小規模和大規模純化應用。 應用領域包括蛋白質、多肽和核酸的固定化。
CNBr純化磁珠產品特性:
CNBr 活化的 SepFast 4 High Flow (4HF) 由高度交聯的 4% 珠狀瓊脂糖制成。 它顯示出高機械剛度,可在降低背壓的情況下實現高流量。
由于瓊脂糖具有出色的親水性和低非特異性結合特性,長期以來一直用于色譜分離。 這些顆粒具有開孔結構,對大蛋白質分子具有出色的傳質特性。
基礎基質與溴化氰 (CNBr) 反應生成活性基團,這些活性基團與待固定分子中的伯胺基團反應。 CNBr 活化的 SepFast 培養基以用添加劑穩定的凍干粉形式提供。
產品使用流程:
1.以下是配體一般的偶聯流程。
(1)將目標配體溶解在含有0.5M NaCl的0.1M NaHCO3,pH 8.3的偶聯緩沖液中。對于蛋白質配體,凝膠濃度為5-20 mg/ml。對于小配體,制作1-10µmol/ml凝膠。偶聯緩沖液的體積應與固定凝膠的體積相同。
(2)稱取所需的粉末(1g干粉提供約9?12 ml的沉降填料)并將其懸浮在預冷的1mM HCl中(1g干粉使用20 ml預冷的1mM HCl)。讓填料在低溫下膨脹2-3分鐘。
(3)快速去除過濾裝置中的液體。
(4)將洗凈吸干的凝膠轉移到偶聯緩沖液中。
(5)漿液在4℃下混合過夜或在室溫下混合3-4小時。
(6)用至少5倍凝膠體積的偶聯緩沖液清洗凝膠。
(7)將凝膠重新懸浮到相同體積的封閉溶液中,0.1M Tris/HCl,pH 8.0或1M乙醇胺pH 8.0,持續2 - 3小時。
(8)用5倍體積的0.1M Tris/HCl+1M NaCl,pH8.0洗滌凝膠,然后用5倍體積的0.1M醋酸鹽緩液+1M NaCl,pH4.0洗滌凝膠。
(9)使用前用工作/平衡緩沖液清洗凝膠。
2. 固定化效率的一般考慮
(1)pH
pH 8.3的緩沖液常用于蛋白質固定。然而偶聯pH值可在6-10之間進行優化以獲得最佳結果(如:高偶聯產率和高配體活性)。注意:配體溶解后要調節偶聯pH值。
(2)偶聯方案
應避免使用含有氨基的溶液??梢砸胂♂尩哪承┯袡C溶劑以提高配體的溶解度。應事先測試此類溶劑的適用性。
(3)鹽
偶聯緩沖液中鹽的存在可以提高固定效率。
(4)基礎基質中的活化基團
對于某些配體或應用,基礎基質中的活化水平可能過高,偶聯配體的活性可能會降低。在降低的pH值下偶聯可能會減少配體分子的連接點。它可以提高偶聯配體的活性。活化基團的受控水解,例如在添加配體前幾個小時用偶聯緩沖液孵育凝膠,也可以減少過度偶聯問題。
(5)屏蔽剩余的活化配體
未與配體反應的活化基團應通過添加額外的含有pH 8 - 9伯胺的小分子(例如Tris或乙醇胺)來封端。
(6)最終填料的洗滌
偶聯反應后需要將未連接或弱連接的配體洗掉。采用高pH值和低pH值交替的洗滌方法可以確保有效去除不需要的物質。
3. 固定化親和填料的使用
配體偶聯填料可用于使用間歇攪拌罐模式或填充柱模式的純化。處理這種材料遵循與處理其他基于瓊脂糖基質相同的原則。
Product Series:
Product | Quantity | Code no. |
CNBr-activated SepFast 4HF | 1 g | 310101-1G |
5 g | 310101-5G | |
500 g | 310101-500G |