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Cube crystal膜蛋白結晶板簡介

閱讀:478        發布時間:2022-8-1

人體約三分之一的蛋白都是膜蛋白,是眾多生理功能的承擔者。膜蛋白參與大量的生理活動,如營養物質交換、信號傳遞和免疫反應等。因各種原因引起的膜蛋白功能障礙會引起各種疾病。同時膜蛋白也是眾多數藥物作用的靶點,因此對膜蛋白結構和功能的研究也就顯得尤為重要。

然而,現階段人類對膜蛋白的了解,特別是其三維空間結構的了解卻知之甚少,除了膜蛋白難以獲得而外,由于膜蛋白特殊的親水/疏水特性,適用于可溶蛋結晶的氣相擴散法(vapor diffusion)傾向擴散法并不是適用于膜蛋白結晶。因此,膜蛋白在體外能否順利結晶以便于后續結構研究也是制約其發展的瓶頸之一。為了解決膜蛋白結晶這一難題,在1996年,LandauRosenbusch通過脂質立方相(LCP)技術成功的獲得了完整的細菌視紫紅質蛋白的3.7埃晶體結構。在此之后,通過脂質立方相結晶膜蛋白成為了一個廣泛實用技術被大多數膜蛋白研究人員所采用。

然而LCP操作繁瑣且耗時較長,因此在進一步研究LCP和氣相擴散法的優勢后,德國Cube Biotech的科研人員推出了基于CIMP Controlled in meso phase)技術的Cubecrystal膜蛋白結晶板,此技術運用了LCP結晶蛋白的原理,同時結合了氣相擴散法的效率將膜蛋白結晶能力推向了一個新的高度。


CIMP技術會實現的幾個階段:(1)Hydrated LCP phase:水含量90%45%之間。(2)Lipidic cubic phase (LCP) :水含量45%26%之間的中間相。(3)Lamellar phase:蛋白質之間的聯系增強,此階段含水量低于26%。晶體的形成可以發生在這些階段中的任何一個。我們的模型蛋白細菌視紫紅質,得到了不同幾何形狀、晶體大小和不同階段的衍射的蛋白結晶。

Cubecrystal膜蛋白結晶板的操作極為簡單,結晶板是基于紫外透光的MRC 2孔結晶板為基礎,每一單元分為結晶雙孔和一個蓄液池組成。兩孔蛋白結晶孔已經預涂脂質(高純度mono-olein )。純化的蛋白溶液可以直接滴加到蛋白質孔內,只需簡單的幾步操作便能得到膜蛋白結晶。

 

 

引用文獻:
1. Kubicek J., Schlesinger, R., Baeken C., Büldt, G., Schäfer, F., Labahn, J. (2012) Controlled in meso phase crystallization - a method for the structural investigation of membrane proteins. PLoS One 7(4):e35458.
2. Landau EM, Rosenbusch JP (1996) Lipidic cubic phases: A novel concept for thecrystallization of membrane proteins. Proc Natl Acad Sci USA 93:14532–14535.
3. Caffrey M (2008) On the mechanism of membrane protein crystallization in lipidic mesophases. Cryst Growth Des 8: 4244–4254.

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