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氣相色譜法測定唾液乳桿菌發酵過程中有機酸測定
有機酸普遍存在于生物樣品、食品、環境樣品以及工業化學品中,但通常樣品復雜且含量很低。色譜法是有機酸分析中zui常用的方法。用液相色譜法(紫外檢測器)測定有機酸時,易受夾雜成分的干擾,引起較大誤差;另外在測定小分子有機酸是需要較低的pH值,易引起色譜柱的流逝。氣相色譜只能分析氣態物質和具有揮發性的有機物,一般來說,氣體和沸點及極性較低的液體,可以直接進樣分析,但對于某些物質,由于它們的極性很強,揮發性、熱穩定性較低,不適于直接進樣分析,對于這類物質,可用化學處理,將其轉化為相應的揮發性衍生物,在進行色譜分析,常用簡單易行的方法有甲酯化、硅烷化等。
檢測有機酸的色譜柱通常有兩種DB-5和FFAP。使用DB-5的柱子要求有機酸必須經過衍生化反應,FFAP柱可以直接測定揮發性有機酸。利用氣相色譜測定有機酸在食品、微生物等方面有報導。氣相色譜測定對酸性代謝產物的測定也多有文章報道。
乳酸菌的應用十分廣泛,市場上乳酸發酵支撐的產品,是農業、紡織、化工、醫藥等行業的重要原料。此外還有乳酸菌飲料、酸奶、醬油等不勝枚舉。近年來,人們逐漸認識到乳酸菌的生理功能及其對人體健康的作用,使乳酸菌在食品和醫藥等方面具有廣闊的應用前景。
目前,人們對乳酸菌帶線的研究主要集中在源于丙酮酸的各種代謝路徑,如雙乙酰途徑、丙酮酸-甲酸途徑、丙酮酸-氧化酶途徑、丙酮酸脫氧酶途徑等,其中,由于雙乙酰對發酵乳品品質其有重要影響,它賦予了很多乳制品奶油味。乳制品發酵過程中雙乙酰的生成途徑、生成條件及調控方式一直是研究人員關注的焦點。有機酸的檢測可以為代謝途徑的研究提供有力支持。唾液乳桿菌是乳酸菌的一種,具有益生功能,本文采用菌株來自功能乳品教育部北京市共建重點實驗室。
儀器準備
樣品處理:
1mg/ml的富馬酸甲醇溶液,2mg/ml的丙酮酸、蘋果酸、a-酮戊二酸、草酸、草酰乙酸甲醇溶液,0.024mg/ml的乳酸甲醇溶液,4mg/ml的丁二酸、異檸檬酸甲醇溶液合相同濃度的各有機酸混合標準液
色譜條件:
進樣方式 | 不分流 |
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進樣口溫度 | 280℃ |
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程序升溫 | 45℃保持2min,然后以6℃/min的速率升至180℃,再以10℃/min的速率升至260℃,保持5min |
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載氣 | 氮氣,流速2.2ml/min |
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進樣量 | 1.μg |
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檢測器溫度 | 280℃ |