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液相色譜法檢測飼料中磺胺類藥物
磺胺藥（Sulfonamides）是一類比較常用的藥物，具有抗菌譜廣、可以口服、吸收較迅速，能通過血腦屏障滲入腦脊液（如磺胺嘧啶，SD）、較為穩(wěn)定、不易變質(zhì)等優(yōu)點。在磺胺藥臨床應(yīng)用中，還發(fā)現(xiàn)有些品種具抑制碳酸酐酶的作用，有的則有降血糖的副作用。經(jīng)過系統(tǒng)的化合物合成與篩選，終于發(fā)展以雙氫克尿噻為代表的磺胺類利尿藥和以甲苯磺丁脲為代表的磺胺類口服降血糖藥。磺胺藥結(jié)構(gòu)與對氨基苯甲酸相似，當前者濃度在體內(nèi)遠大于后者時，可在二氫葉酸合成中取代對氨基苯甲酸，阻斷二氫葉酸的合成。這導(dǎo)致微生物的葉酸合成受阻，生命不能延續(xù)。
青霉素和其他抗生素相繼出現(xiàn)后，由于他們具有更高的抗菌作用，磺胺藥的應(yīng)用受到影響，但磺胺藥具有性質(zhì)穩(wěn)定、易于組織生產(chǎn)、價格低廉、服用方便等優(yōu)點，在抗菌藥物中始終占有重要的地位，尤其被國內(nèi)外畜禽養(yǎng)殖業(yè)廣泛使用。畜禽養(yǎng)殖業(yè)是食品的源頭，這對人類健康構(gòu)成潛在的巨大威脅。長期食用含有磺胺類藥物超標的畜產(chǎn)品，可能會破壞人的造血系統(tǒng)，引起粒細胞缺乏癥等。因此，限制磺胺類藥物在畜禽養(yǎng)殖業(yè)中的應(yīng)用是保證食品安全的重要環(huán)節(jié)。
對于成分復(fù)雜的飼料中多種磺胺類藥物的檢測，應(yīng)用紫外檢測器和梯度洗脫法就可以靈敏、快速、的完成分析。
儀器介紹
LC600C二元高壓梯度液相色譜系統(tǒng)（南京科捷分析儀器有限公司）
- 配備高壓梯度泵1臺（內(nèi)含2臺恒流泵和1臺梯度混合器），梯度混合器（）性能*
2、16:9的TFT彩屏支持脫機時通過儀器觸屏輸入和顯示所有信息。
3、支持手動進樣，可選配自動進樣器，采用注射器定量，流動相過針，電腦控制進樣量大小，無需更換定量環(huán)即可改變進樣體積，極大的方便用戶操作。
4、廣泛應(yīng)用于研究開發(fā)、醫(yī)藥檢驗、食品檢測、化工分析、環(huán)境監(jiān)測等眾多分析領(lǐng)域。
實驗方法
樣品處理：
1、稱取2.000g試樣于50mL具塞離心管中，加入15mL乙酸乙酯，漩渦振蕩混勻，30 ℃水浴中超聲提取3min，期間取出搖動1次，然后以4000 r/min離心3min，靜置后收集上清液轉(zhuǎn)移至另一管中，重復(fù)提取殘渣2次，合并上清液，轉(zhuǎn)入雞心瓶中40℃旋轉(zhuǎn)蒸至近干，加入3mL乙酸乙酯，充分搖勻溶解殘渣。
2、用5mL正己烷和5mL乙酸乙酯預(yù)淋氨基固相萃取柱，再將上述溶解液過小柱，上樣后，首先用5 mL正己烷淋洗此柱去除雜質(zhì)，減壓抽干10min，然后用2 mL洗脫液洗脫，收集洗脫液并盡可能抽干小柱。
3、洗脫液過0.45μm有機性濾膜，作為待測液（上樣溶液、淋洗液和洗脫液的流速均控制在0.8~1.0mL/min。）。
分析條件：
色譜柱 | C18柱150mm×4.6mm | ||
檢測器 | 紫外檢測器 | ||
流動相 | A：乙腈-甲醇（V/V=1：1）；B：0.1%乙酸溶液 | ||
洗脫程序 | 時間/min | A液/% | B液/% |
0 | 15 | 85 | |
30 | 50 | 50 | |
34 | 15 | 85 | |
流速 | 0.8mL/min | ||
柱溫 | 20℃ | ||
檢測波長 | 270nm | ||
進樣量 | 20μL | ||
譜圖分析：
飼料中磺胺類藥物的液相色譜圖
1磺胺醋酰 2磺胺嘧啶 3磺胺吡啶 4磺胺二甲基嘧啶 5磺胺對甲氧噠嗪
6磺胺甲基異噁唑 7磺胺間甲氧嘧啶 8磺胺二甲氧嘧啶 9磺胺喹噁啉