皖儀科技離子色譜法測定透明質酸中的季銨鹽
引言
透明質酸(Hyaluronic acid，HA)，又稱玻尿酸，是一種酸性粘多糖。透明質酸以其獨特的分子結構和理化性質在機體內顯示出多種重要的生理功能，如潤滑關節，調節血管壁的通透性，調節蛋白質，水電解質擴散及運轉，促進創傷愈合等。具有較高臨床價值的生化藥物，廣泛應用于各類眼科手術，如晶體植入、角膜移植和抗青光眼手術等。還可用于治療關節炎和加速傷口愈合。將其用于化妝品中，能起到獨特的保護皮膚作用，可保持皮膚滋潤光滑、細膩柔嫩、富有彈性，具有防皺、抗皺、美容保健和恢復皮膚生理功能的作用。
透明質酸是人體皮膚組成成分之一，并且具有良好的保濕作用，目前被廣泛用于第四代化妝品中，被譽為理想的天然保濕因子，國際上添加HA的化妝品種類已從最初的膏霜、乳液、化妝水、精華素膠囊、膜貼擴展到溶液、粉餅、口紅、洗發護發劑、摩絲等，應用日趨廣泛。但天然透明質酸存在穩定性較差，易發生降解和親水性過強等缺點，限制了其應用，因此通過對透明質酸進行修飾改性，從而實現新的生物活性和功能，最常見的一種改性透明質酸就是透明質酸的季銨鹽。季銨鹽作為常規的陽離子，可以采用離子色譜進行測試。
1 實驗方法
1.1測試條件
儀器：IC6200系列離子色譜儀配置陽離子抑制器
色譜柱：陽離子分析柱柱溫：30℃；
流速：1ml/min；
進樣量：25μL；
檢測器：電導檢測器
1.2 實驗試劑
淋洗液：10mM 甲烷磺酸溶液等度淋洗；
氯化鈉溶液：稱取7g氯化鈉，用水溶解并定容至100mL,配制成0.07g/mL的氯化鈉溶液。
氫氧化鈉溶液：稱取氫氧化鈉4g，用水溶解并定容至100mL,配制成1mol/L的氫氧化鈉溶液。
標樣：2,3-二羥基丙基-三甲基氯化銨標準物質（純度97%）；
鈉離子標準溶液：ρ（K+）=1000mg/L
銨根離子標準溶液：ρ（NH4+）=1000mg/L
樣品：客戶提供
標準儲備溶液：稱取0.0871g季銨鹽（2,3-二羥基丙基-三甲基氯化銨），用去離子水溶解并定容至50mL，濃度為1690mg/L。
1.3 標準曲線的制備
分別精密移取0.1ml、0.2ml、0.4 ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml標準儲備溶液，置于6個10mL容量瓶中，加超純水定容至標線，混勻，即得。標準曲線濃度梯度表見表1；
表1 標準曲線濃度梯度表
1.4 樣品溶液配制
稱取待測樣品0.2139g于25mL容量瓶中，加入2mL氫氧化鈉溶液，5mL水，充分混勻后置于上45℃恒溫水解2h，水解完成后加入2mL氯化鈉溶液和10mL乙腈，混勻，放置室溫，隨后精確定容至刻度，充分混合均勻，待透明質酸沉降后取上清液1mL，加入1mL氯化鈉溶液、5mL乙腈，用水定容至10mL，即得待測樣品溶液。
2 測試結果
2.1 干擾實驗測試
在前處理中可能引入的鈉離子和銨根離子，需要進行干擾實驗。按照“1.1“項測試條件進行測試，得到干擾性測試圖譜，2,3-二羥基丙基-三甲基氯化銨在測試色譜條件下出峰良好，且與前處理中可能引入的鈉離子和銨根離子保留時間差距明顯，不會形成干擾。干擾性實驗測試圖譜見圖1。
圖1 陰離子測試圖譜
2.2 標曲測試
標準曲線系列濃度見表1，按照1.1的測試條件進行測試，得到標準曲線譜圖多點重疊譜圖如圖2，待測離子在該色譜條件下標準曲線線性均大于0.9999，線性良好，線性方程如下表2。
圖2 標準曲線譜圖多點重疊色譜圖
表2 陰離子線性方程
2.3 樣品測試
按照“1.1"項色譜條件，連續注入數針樣品溶液進樣分析，測得樣品圖譜見圖3。連續3針測試數據見表3
圖3 樣品連續3針測試重疊圖譜
表3 樣品連續3針測試數據
3 結論
本次實驗實現了在淋洗液體系中不加入乙腈相條件下的有效色譜分離與定性，避免了有機相對離子色譜系統的損傷；實驗結果表明，在本次實驗中，儀器基線平穩、背景值低、季銨鹽色譜峰無雜峰干擾、無明顯拖尾、保留時間穩定、滿足定量需要。
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