引言
由于與宿主的健康及疾病密切相關(guān)，腸道菌群組成的分析已成為健康科學(xué)領(lǐng)域的重點(diǎn)研究目標(biāo)。自1998年起，福州大學(xué)生物工程研究所的謝俊斌等[1]人相繼致力于液相色譜技術(shù)分離、分析細(xì)菌細(xì)胞的可能性。此后，陳強(qiáng)、賴(lài)偉萍、陳萍、林娟等[1]人應(yīng)用高效液相色譜技術(shù)在細(xì)菌分離分析方面做了大量相關(guān)的研究。這些成果表明該技術(shù)作為細(xì)菌分離、分析的有效手段，不僅能夠分離不同種屬的細(xì)菌，而且對(duì)于處于不同生長(zhǎng)階段、具有不同理化性質(zhì)的細(xì)菌都能夠?qū)崿F(xiàn)分離。
其中，高尿酸血癥是人體內(nèi)血尿酸含量顯著高于正常水平的代謝性疾病[2]，利用益生菌降解食物中外源性嘌呤類(lèi)成分成為治療高尿酸血癥的新方法[3]。因此，利用HPLC從多株實(shí)驗(yàn)菌株中篩選降解核苷酸(腺苷酸、鳥(niǎo)苷酸)、核苷(腺苷、鳥(niǎo)苷)、嘌呤(黃嘌呤、次黃嘌呤、鳥(niǎo)嘌呤)、尿酸能力最強(qiáng)的益生菌具有重要作用[4]。
本方法是用LC3200系列產(chǎn)品（二元泵+UV+自產(chǎn)色譜柱）對(duì)菌群實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的尿酸、肌苷、鳥(niǎo)苷進(jìn)行有效檢測(cè)及分離。
皖儀科技應(yīng)用方案
儀器配置
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1.測(cè)試條件
儀器：液相色譜儀LC3200系列配有UV檢測(cè)器；
色譜柱：皖儀自產(chǎn)WD-C18柱， 4.6×250mm, 5μm ；
柱溫：30℃；
流速：0.8mL/min；
進(jìn)樣量：10μL；
檢測(cè)器：UV檢測(cè)器；
檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm；
流動(dòng)相：磷酸鹽緩沖液，PH=3.2；
2.試劑及實(shí)驗(yàn)材料
磷酸二氫鉀、四丁基硫酸氫銨；
一次性注射器（0.5-2mL）；
水系針式過(guò)濾器（0.22μm）；
3.標(biāo)樣制備
發(fā)酵液過(guò)0.22μm的濾膜，待測(cè)
4.測(cè)定方法
在上述測(cè)試條件下，待儀器穩(wěn)定后，按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液進(jìn)行上機(jī)測(cè)試。
測(cè)試結(jié)果
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1.對(duì)照品的測(cè)試
1.1尿酸對(duì)照
1.2腺苷、肌苷對(duì)照
由上圖可知，本方法對(duì)尿酸、腺苷、肌苷能有效的分離檢測(cè)。
2.樣品檢測(cè)分析
2.1尿酸樣品
2.2腺苷、肌苷樣品
總結(jié)
本次試驗(yàn)采用HPLC法檢測(cè)菌群代謝液中尿酸、腺苷、肌苷,方法簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確,該方法具有良好的應(yīng)用前景，可以作為菌群移植、生物菌株等相關(guān)應(yīng)用分析。
參考文獻(xiàn)：
[1] 液相色譜技術(shù)在輔助腸道菌群分離、分析中的應(yīng)用基礎(chǔ)研究；
[2] 降血尿酸益生菌株的篩選和對(duì)高尿酸血癥模型大鼠作用機(jī)理的探索；
[3] 中山市橫欄地區(qū)高尿酸血癥患者實(shí)施多學(xué)科團(tuán)隊(duì)健康教育的效果研究；
[4] 綠球藻胞外多糖的提取和體外活性研究。
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