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SRM927f牛血清白蛋白(美國nist標準品)主要用于對總血清蛋白臨床分析中使用的程序進行標準化,對這些程序中使用的日常工作標準進行嚴格評估,并作為比色法測定總蛋白的參考標準方法。此 SRM 是已知蛋白質濃度和純度的溶液(質量分數約為 7%)。
SRM 927f 由 10 個安瓿組成,每個安瓿含有大約 2.2 mL 的溶液。
該 SRM 的總蛋白質含量是使用縮二脲參考方法 [1] 測定的,推薦用于標準化實驗室制備的蛋白質溶液和“正常"血清池。然后可以使用這種標準化的“正常"血清來校準折射計或其他用于血清蛋白估計的儀器。 SRM 927f 牛血清白蛋白(7 % 溶液) 標準品 還可用于其他程序,例如凝膠擴散、氨基酸分析、電泳、氮測定或其他需要充分表征的蛋白質進行校準或評估的測試。牛血清白蛋白 (BSA) 濃度的測量使用兩種獨立的方法,包括氨基酸分析和縮二脲法。兩種方法的結果報告如下:1)通過氨基酸分析證明的 BSA 濃度和 2)通過縮二脲法得到的參考 BSA 濃度。
SRM927f牛血清白蛋白(美國nist標準品)由 Equitech-Bio, Inc. (Kerrville, TX) 制備和包裝。源牛血清是在美國在美國農業部注冊的機構生產的,僅用于制造用于體外診斷、研究和進一步制造或技術目的的產品。使用 0.02 mol/L 氯化鈉將該 SRM 的 BSA 從 30% BSA 商業庫存(Equitech-Bio, Inc., Kerrville, TX)稀釋至約 7%,并使用氫氧化鈉將 pH 值調節至 6.5 至 6.8。通過膜過濾對材料進行滅菌,放入無菌玻璃氬氣沖洗安瓿中并火焰密封。
SRM 927f 價值分配中的所有分析均在 NIST 進行。通過氨基酸分析 (ID-LC/MS/MS) 測量 BSA 濃度:氨基酸分析方法涉及同位素稀釋液相色譜/串聯質譜 (ID-LC/MS/MS) [3]。稀釋 SRM 927f 和 SRM 927e(作為對照)的未衍生樣品,然后與苯丙氨酸、脯氨酸、異亮氨酸、亮氨酸和纈氨酸的穩定同位素標記類似物混合,然后用液相鹽酸 (HCl) 水解 48 小時在大約 130 oC 的密封壓力容器中。水解后,將樣品凍干,然后用 0.1 mL/L 甲酸水溶液復溶。在嵌入酸性離子對基團的反相分析柱上使用梯度洗脫混合模式色譜法分離氨基酸。在三重四極桿質譜儀上進行測量,監測每種氨基酸的特定躍遷。
通過氨基酸分析確定的 BSA 認證濃度值在表 1 中提供。 NIST 認證值是 NIST 對其準確性的最高置信度的值,因為所有已知或可疑的偏差來源都已被排除。調查或分析[2]。 BSA 濃度的認證值基于同位素稀釋液相色譜/串聯質譜 (ID-LC/MS/MS) [3] 的結果。
使用縮二脲法測定的參考 BSA 濃度見表 2。使用縮二脲參考法 [1] 測定 SRM 927f 中的 BSA 濃度,使用 SRM 927e 作為外標。參考值是非認證值,是基于真實值的最佳估計可用數據;然而,這些值不符合 NIST 的認證標準,并且提供了相關的不確定性,這些不確定性可能僅反映測量精度,可能不包括所有不確定性來源,或者可能反映多種分析方法之間缺乏足夠的統計一致性 [2]。表 3 中提供了其他特性的參考值,包括使用電噴霧電離質譜法測定的密度和相對平均分子量。
SRM927f牛血清白蛋白(美國nist標準品) 僅供研究使用。用于制備 SRM 927f 牛血清白蛋白(7% 溶液)的血液采集自美國的牛。僅使用已通過美國農業部 (USDA) 食品安全檢驗局 (FSIS) 檢查的牛/尸體的血液。該材料并非來自牛群中出現牛海綿狀腦病 (BSE) 病例的牛,并且該產品不包含且并非源自委員會第 97 號決定中定義的特定風險材料/ 534/EC。沒有使用來自結核病和/或布魯氏菌病反應器的牛血。
SRM 927f 牛血清白蛋白(7 % 溶液)標準品以密封安瓿瓶形式提供給用戶。 SRM 應存放在溫度介于 2 °C 和 8 °C 之間的冰箱中。安瓿不應冷凍,因為在解凍過程中安瓿可能會破裂。一旦打開安瓿瓶,應立即使用該溶液。打開的安瓿瓶中任何未使用的溶液都應丟棄。較低濃度的蛋白質溶液可以通過轉移適當的分裝到容量瓶中并稀釋至刻度。 SRM 不提供稀釋劑;可以使用氯化鈉水溶液稀釋劑,例如濃度為0.15mol/L的溶液。由于蛋白質損失的可能性(可能是由于實驗室設備上的蛋白質吸收),在進行超過 100 倍的稀釋時應小心。
不當使用:此 SRM 不打算用作染料結合測試的標準,因為 BSA 的染料結合特性可能與其他被檢測的蛋白質不同。此外,此 SRM 不適用于檢查預先校準的折射計、免疫化學方法或作為膽紅素標準化的添加劑。
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